[发明专利]发夹型单链RNA分子的制备方法

权利要求书

1.发夹型单链RNA分子的制备方法，其是抑制靶基因表达的发夹型单链RNA分子的制备方法，包括下述的步骤：

在脱水缩合剂的存在下，在包含缓冲液和亲水性有机溶剂的混合溶剂中，使下述式(I)所表示的第1单链寡RNA分子与下述式(II)所表示的第2单链寡RNA分子进行反应，

5’-Xc-Lx¹　・・・(I)

Lx²-X-Y-Ly-Yc-3’　・・・(II)

式(I)和式(II)中，X、Xc、Y和Yc由核糖核苷酸残基构成，Xc与X互补，Yc与Y互补，Ly为非核苷酸性接头，Lx¹为具有氨基的非核苷酸性接头，Lx²为具有羧基的非核苷酸性接头，X-Y包含针对上述靶基因的基因表达抑制序列，

上述脱水缩合剂选自三嗪型脱水缩合剂、包含N-羟基含氮芳香环结构的脲鎓型脱水缩合剂、碳二亚胺型脱水缩合剂、2-卤代吡啶鎓型脱水缩合剂、和甲脒鎓型脱水缩合剂，

在上述脱水缩合剂为碳二亚胺型脱水缩合剂的情况下，该脱水缩合剂与N-羟基含氮芳香族化合物或氰基(羟基亚氨基)乙酸酯组合使用，

在上述脱水缩合剂为2-卤代吡啶鎓型脱水缩合剂的情况下，该脱水缩合剂与N-羟基含氮芳香族化合物组合使用，

在上述脱水缩合剂为甲脒鎓型脱水缩合剂的情况下，该脱水缩合剂与N-羟基含氮芳香族化合物或N-烃取代咪唑衍生物组合使用。

2.权利要求1所述的制备方法，其中，上述接头Ly为具有氨基酸骨架或氨基醇骨架的非核苷酸性接头，上述接头Lx²为具有氨基酸骨架的非核苷酸性接头。

3.权利要求1或2所述的制备方法，其中，上述Ly为包含吡咯烷骨架和哌啶骨架的至少一者的非核苷酸性接头、或包含-NHCH₂COO-的非核苷酸性接头，上述Lx²为包含具有羧基的吡咯烷骨架和哌啶骨架的至少一者的非核苷酸性接头、或包含-NHCH₂COOH的非核苷酸性接头。

4.权利要求1～3中任一项所述的制备方法，其中，Lx¹由下述式(III)表示，Lx²由下述式(IV)或下述式(IV’)表示，

[化学式1]

・・・(III)

式(III)中，R¹为可被取代的亚烷基链，-OR¹经由磷酸二酯键与Xc的3’末端结合，

[化学式2]

・・・(IV)　或　・・・(IV’)

式(IV)中，R²为可被取代的亚烷基链，p为1或2，-OR²经由磷酸二酯键与X的5’末端结合，式(IV’)中，R²为可被取代的亚烷基链，-OR²经由磷酸二酯键与X的5’末端结合。

5.权利要求1～4中任一项所述的制备方法，其中，

(i) 上述包含N-羟基含氮芳香环结构的脲鎓型脱水缩合剂为苯并三唑基脲鎓型脱水缩合剂，

(ii) 上述N-羟基含氮芳香族化合物为羟基苯并三唑或其衍生物，

(iii) 上述氰基(羟基亚氨基)乙酸酯为氰基(羟基亚氨基)乙酸烷基酯，和/或

(iv) 上述N-烃取代咪唑衍生物为N-烷基咪唑衍生物。

6.权利要求1～5中任一项所述的制备方法，其中，上述亲水性有机溶剂为亲水性的非质子性有机溶剂。

7.权利要求6所述的制备方法，其中，上述亲水性的非质子性有机溶剂为二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、N,N’-二甲基亚乙基脲、或乙腈。