[发明专利]用于转移生物分子至受伤细胞的组合物和方法

权利要求书

1.一种用于将生物分子转移至细胞中的方法，所述方法包括：

a)将包含至少一种受体细胞的受体植物细胞培养物与包含至少一种生物分子的培养基混合，以获得包含所述受体细胞的经混合的细胞培养物；以及

b)使所述经混合的细胞培养物的所述受体细胞受伤，以产生至少一种产物细胞，在所述混合和/或受伤之后，所述生物分子转移至所述产物细胞中已经发生。

2.如权利要求1所述的方法，其还包括

c)根据可选择的或可筛选的标记，筛选或选择所述至少一种产物细胞或其子代细胞、或者从所述至少一种产物细胞或其子代细胞发育或再生的植物。

3.如权利要求1所述的方法，其中：

(a)所述受体植物细胞培养物、培养基或经混合的细胞培养物还包含渗压剂；或者

(b)所述受体植物细胞培养物的一个或多个受体细胞包含基因型、遗传背景、转基因、天然等位基因、所关注的编辑或突变；或者

(c)所述至少一种产物细胞或其子代细胞包含来自所述受体植物细胞的基因型、遗传背景、转基因、天然等位基因、所关注的编辑或突变；或者

(d)所述受体植物细胞培养物是愈伤组织培养物或细胞悬浮培养物。

4.如权利要求1所述的方法，其还包括

c)在步骤a)或步骤b)之前、期间或之后，将渗压剂添加至所述受体植物细胞培养物、培养基或经混合的细胞培养物中。

5.如权利要求3或4所述的方法，其中所述渗压剂包括：

(a)聚乙二醇(PEG)；或者

(b)糖或糖醇。

6.如权利要求1所述的方法，其中所述受体植物细胞培养物包含具有质体基因组编码的标记基因和/或核基因组编码的标记基因的细胞。

7.如权利要求6所述的方法，其还包括

c)在步骤(b)期间和/或之后，根据所述核基因组编码的标记基因和/或质体基因组编码的标记基因的存在，筛选或选择所述经混合的细胞培养物的所述至少一种产物细胞、或者其至少一种子代细胞、或者从所述至少一种产物细胞或其子代细胞发育或再生的植物。

8.如权利要求6所述的方法，其中所述核基因组编码的标记基因或质体基因组编码的标记基因是可选择的标记基因或可筛选的标记基因。

9.如权利要求8所述的方法，其中：

(a)所述可选择的标记基因选自由以下组成的组：aadA、rrnS、rrnL、nptII、aphA-6、psbA、bar、HPPD、ASA2和AHAS；或者

(b)所述可筛选的标记基因是gfp或gus。

10.如权利要求6所述的方法，其中所述受体植物细胞培养物的所述细胞或其子代细胞对于所述质体编码的标记基因是同质性的。

11.如权利要求1所述的方法，其中所述至少一种生物分子包括位点特异性核酸酶、向导RNA、或者一种或多种包含编码位点特异性核酸酶的序列和/或编码向导RNA的序列的重组DNA分子。

12.如权利要求11所述的方法，其中所述位点特异性核酸酶是锌指核酸酶(ZFN)、大范围核酸酶、RNA指导的核酸内切酶、TALE核酸内切酶(TALEN)、重组酶或转座酶。

13.如权利要求1所述的方法，其还包括：

c)筛选或选择具有编辑或突变的至少一种经编辑或突变的产物细胞或其子代细胞、或者从所述至少一种经编辑的产物细胞或其子代细胞发育或再生的植物。

14.如权利要求13所述的方法，其中根据通过所述编辑或突变产生的以及存在于所述发育或再生的植物或其子代植物、植物部分或种子中的性状或表型来筛选或选择从所述至少一种经编辑或突变的产物细胞或其子代细胞发育或再生的所述植物。