[发明专利]细胞选择方法

说明书

本发明涉及筛选转基因细胞群体中产生目的蛋白的细胞的方法。所述方法包括在细胞培养基中包括至少一种非天然氨基酸(nnAA)的培养条件下培养转基因细胞。所述转基因细胞包含至少一种编码融合蛋白的多核苷酸，所述融合蛋白具有第一结构域和第二结构域，所述第一结构域编码目的蛋白，所述第二结构域编码的结构域有助于当所述转基因细胞表达所述第二结构域时检测表达所述目的蛋白的所述转基因细胞。

背景技术

技术领域

本发明涉及筛选转基因细胞群体中产生目的蛋白的细胞的方法。所述方法包括在细胞培养基中包括至少一种非天然氨基酸(nnAA)的培养条件下培养转基因细胞。所述转基因细胞包含至少一种编码融合蛋白的多核苷酸，所述融合蛋白具有第一结构域和第二结构域，所述第一结构域编码目的蛋白，所述第二结构域编码的结构域有助于当所述转基因细胞表达所述第二结构域时检测表达所述目的蛋白的所述转基因细胞。融合蛋白还包含至少一种nnAA。

背景技术

在整个药物开发过程中使用产生目的蛋白的转基因细胞。例如，在药物开发的早期，这类细胞用于抗体生成活动和基于细胞的测定以评估活性，而在药物开发的后期，这类细胞用于生产生物药物。因此，转基因细胞的选择对于药物开发至关重要。

已经进行了许多努力来提供用于选择产生目的蛋白的转基因细胞的替代方法。例如，流式细胞术使得鉴定具有特定特征的细胞更加可行。流式细胞术的重要优点包括筛选大量细胞的能力。然而，流式细胞术是费时费力的。

本发明通过例如减少工作量和增加效率来提供优于现有方法的优点。例如，PCT公开号WO 2003/014361公开了一种系统，所述系统使用终止密码子抑制技术来实现融合蛋白的通读和表达，其中融合蛋白的结构域之一是抗生素抗性基因。然后在抗生素存在下培养细胞，以确定哪些细胞表达融合蛋白。但是，所述方法不允许选择高水平的融合蛋白生产者，因此没有选择高产克隆的机制。类似地，PCT公开号WO 2005/073375公开了抗生素依赖性系统的使用，使得在实现终止密码子抑制之前，转基因细胞必须在培养中暴露于抗生素至少两天。这些方法也不会导致在单轮克隆/选择后选择高产者的能力。PCT公开号WO2010/022961使用了密码子序列，所述密码子序列使得能够实现终止密码子的漏通读。这样的系统是不可诱导的，表现出效率低并且不能被严格控制。因此，在单轮克隆和选择后，该系统也不能选择目的蛋白的高产者。

本发明提供了一种具有许多优点(包括提高的效率和控制)的富集和选择转基因细胞的新颖方法。该方法也已经跨不同的目的蛋白得到验证，并且因此可以用作富集和选择表达任何目的蛋白的转基因细胞的平台。

发明内容

本发明涉及筛选转基因细胞群体中产生目的蛋白的细胞的方法。所述方法包括在细胞培养基中包括至少一种非天然氨基酸(nnAA)的培养条件下培养转基因细胞。所述转基因细胞包含至少一种编码融合蛋白的多核苷酸，所述融合蛋白具有第一结构域和第二结构域，所述第一结构域编码目的蛋白，所述第二结构域编码的结构域有助于当所述转基因细胞表达所述第二结构域时检测表达所述目的蛋白的所述转基因细胞。融合蛋白还包含至少一种nnAA。

在一个实施例中，转基因细胞包含至少一种编码融合蛋白的多核苷酸，所述融合蛋白具有第一结构域和第二结构域，所述第一结构域编码目的蛋白，所述第二结构域编码锚结构域，当转基因细胞表达所述第二结构域时，所述锚结构域将所述目的蛋白锚定至细胞膜。这些融合蛋白还包含至少一种nnAA。

在另一个实施例中，转基因细胞包含至少一种编码融合蛋白的多核苷酸，所述融合蛋白具有第一结构域和第二结构域，所述第一结构域编码目的蛋白，所述第二结构域编码标签，当转基因细胞表达所述第二结构域时，所述标签对所述目的蛋白进行标记。这些融合蛋白还包含至少一种nnAA。

附图说明