[发明专利]从血液中分离靶细胞的方法

说明书

本文公开了从血液中分离靶细胞的方法，包括在开口容器中将体积小于或等于10mL的未稀释血液样品和结合剂混合，每种结合剂包含(A)主要结合剂，主要结合剂含能结合未稀释血液样品中靶细胞上的至少一个细胞表位的试剂，(B)结合于主要结合剂的第一接头，以在未稀释血液样品中产生附接结合剂的靶细胞；将未稀释的血液样品中附接结合剂的靶细胞与多种悬浮剂接触，悬浮剂包括能附接第一接头的第二接头，以产生未稀释的附接悬浮剂的靶细胞混合物；将未稀释的附接悬浮剂的靶细胞混合物稀释至少20％，以产生稀释的附接悬浮剂的靶细胞混合物；向稀释的附接悬浮剂的靶细胞混合物施加矢量力，如离心力，以产生分层的稀释的附接悬浮剂的靶细胞混合物；将分层的稀释的附接悬试剂的靶细胞混合物中的附接悬试剂的靶细胞去除；以及将靶细胞从附接悬试剂的靶细胞混合物中分离。

优先权声明

本申请要求2018年8月31日提交的序列号为62/725750的美国临时专利申请的优先权，并通过引用将其全部内容合并与此。

背景技术

免疫学、干细胞生物学、组织工程学、传染病生物学、生理学、生物物理学、分子遗传学和病理学等领域的基础研究通常涉及应用从志愿献血者新鲜血液中分离出的细胞。通常这些是小体积的制剂(一般少于一百万个细胞)，由新鲜抽取的小静脉样本(大约10mL或更少的血液)制成。研究人员将越来越多地寻求基于所需细胞类型的表面免疫表型(如外周血单个核细胞，而不是混合细胞型制剂，即所谓的“PBMC制剂”(PBMC preps))分离单一分子特异性细胞类型。

基础研究人员需要以最小的成本及投资快速地从小样本量中制备这种靶细胞分离物，这通常使得目前使用的最复杂的细胞分离方法不适于这一需要。现有方法存在多种缺陷，包括成本昂贵、生产量非常低、生产的靶细胞回收率和纯度不足以满足研究者的需求，和/或不能从全血中分离靶细胞，需要在分离靶细胞之前进行耗时的红细胞去除和PBMC制剂的初始步骤。因此，需要一种研究规模的血细胞分离的方法，该方法成本低、资金强度大、生产量快速、靶细胞回收率和纯度高，适于在未进行预先PBMC制备和/或红细胞去除的情况下的小于毫升级的全血样品。

发明内容

一方面，公开了从血液中分离靶细胞的方法，包括：

(a)将以下在开口容器中混合

(i)体积小于或等于10mL的未稀释血液样本，及

(ii)结合剂，其中每种结合剂包含(A)主要结合剂(primarybinding agent)，所述主要结合剂包含能够结合未稀释血液样品中靶细胞上的至少一个细胞表位的试剂，(B)结合于主要结合剂的第一接头，

其中所述混合发生在适于促进主要结合剂与靶细胞结合的时间和条件下，以在未稀释的血液样品中产生附接结合剂的靶细胞；

(b)将未稀释的血液样品中附接结合剂的靶细胞与多种悬浮剂接触，其中每种悬浮剂包含结合到悬浮剂上的第二接头，其中第二接头能够与第一接头连接，其中所述接触发生的时间和条件适于促进第二接头与第一接头连接，以产生未稀释的附接悬浮剂的靶细胞混合物；

(c)将未稀释的附接悬浮剂的靶细胞混合物稀释至少20％，以产生稀释的附接悬浮剂的靶细胞混合物；

(d)向稀释的附接悬浮剂的靶细胞混合物施加矢量力，例如离心力，以产生分层的稀释的附接悬浮剂的靶细胞混合物；

(e)将分层的稀释的附接悬浮剂的靶细胞混合物中的附接悬浮剂的靶细胞去除；和

(f)将靶细胞从附接悬浮剂的靶细胞中分离。