[发明专利]通过使用转录因子来增加蛋白质表达的手段和方法

权利要求书

1.一种增加真核宿主细胞中重组目标蛋白的产量的方法，所述方法包括在所述宿主细胞中过表达编码至少一种转录因子的至少一种多核苷酸，由此与不过表达编码所述转录因子的多核苷酸的宿主细胞相比，使所述重组目标蛋白的产量增加，其中所述转录因子至少包含：

a)DNA结合结构域，其包含：

i)SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，或

ii)SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的功能同系物，其与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少60％的序列同一性和/或与SEQ ID NO:87所示的氨基酸序列具有至少60％的序列同一性，和

b)激活结构域。

2.根据权利要求1所述的方法，所述方法包括：

i)将所述宿主细胞工程化以过表达编码至少一种转录因子的至少一种多核苷酸，所述转录因子至少包含：

a)DNA结合结构域，其包含：

a1)SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，或

a2)SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的功能同系物，其与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少60％的序列同一性和/或与SEQ ID NO:87所示的氨基酸序列具有至少60％的序列同一性，和

b)激活结构域，

ii)将所述宿主细胞工程化以包含编码所述目标蛋白的多核苷酸，

iii)在适宜条件下培养所述宿主细胞以过表达所述编码至少一种转录因子的至少一种多核苷酸并过表达所述目标蛋白，可选地

iv)从细胞培养物中分离所述目标蛋白，和可选地

v)纯化所述目标蛋白。

3.一种通过真核宿主细胞制备重组目标蛋白的方法，所述方法包括：

i)提供被工程化以过表达编码至少一种转录因子的至少一种多核苷酸的宿主细胞，其中所述宿主细胞进一步包含编码目标蛋白的多核苷酸，其中所述转录因子至少包含：

a)DNA结合结构域，其包含：

a1)SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，或

a2)SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的功能同系物，其与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少60％的序列同一性和/或与SEQ ID NO:87所示的氨基酸序列具有至少60％的序列同一性，

b)激活结构域，

ii)在适宜条件下培养所述宿主细胞以过表达所述编码至少一种转录因子的至少一种多核苷酸并过表达所述目标蛋白，可选地

iii)从细胞培养物中分离所述目标蛋白，和可选地

iv)纯化所述目标蛋白，和可选地

v)修饰所述目标蛋白，和可选地

vi)配制所述目标蛋白。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中与工程化之前的所述宿主细胞相比，所述转录因子的过表达使模型蛋白scFv(SEQ ID NO.13)和/或vHH(SEQ ID NO.14)的产量增加。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中将所述编码至少一种转录因子的多核苷酸整合在所述宿主细胞的基因组中或包含在未整合至所述宿主细胞的基因组中的载体或质粒中。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述编码至少一种转录因子的多核苷酸编码异源或同源转录因子。

7.根据权利要求6所述的方法，其中编码异源转录因子的多核苷酸的过表达通过如下实现：

i)交换或修饰与所述编码异源转录因子的多核苷酸可操作地连接的调控序列，或

ii)将处于启动子控制下的一个或多个拷贝的所述编码异源转录因子的多核苷酸引入所述宿主细胞。

8.根据权利要求6所述的方法，其中编码同源转录因子的多核苷酸的过表达通过如下实现：

i)使用启动子，所述启动子驱动所述编码同源转录因子的多核苷酸的表达，

ii)交换或修饰与所述编码同源转录因子的多核苷酸可操作地连接的调控序列，或

iii)将处于启动子控制下的一个或多个拷贝的所述编码同源转录因子的多核苷酸引入所述宿主细胞。