[发明专利]特异性刺激经基因修饰免疫细胞的存活和扩增的方法

权利要求书

1.一种载体，其包含编码以下的核酸：

a)促红细胞生成素(Epo)受体；

b)自裂解肽或内部核糖体进入位点；和

c)细胞表面受体。

2.如权利要求1所述的载体，其中该Epo受体与SEQ ID NO:2具有至少90％序列同一性。

3.如权利要求1所述的载体，其中该Epo受体是突变型Epo受体。

4.如权利要求3所述的载体，其中该核酸具有编码该Epo受体的第8外显子内的终止密码子的突变。

5.如权利要求3所述的载体，其中该Epo受体与SEQ ID NO:6具有至少90％序列同一性。

6.如权利要求1所述的载体，其中该核酸进一步编码Flag标签(DYKDDDDK(SEQ ID NO:23))，该Flag标签是该Epo受体的C末端。

7.如权利要求1所述的载体，其中该核酸包含自裂解肽。

8.如权利要求7所述的载体，其中该自裂解肽是2A肽。

9.如权利要求1所述的载体，其中该细胞表面受体包含结合靶细胞抗原的胞外受体结构域。

10.如权利要求1至8中任一项所述的载体，其中该细胞表面受体是嵌合抗原受体，其包含：

i)信号肽；

ii)结合靶细胞抗原的胞外受体结构域；

iii)将该胞外受体结构域锚定在细胞表面上的铰链和跨膜结构域；和

iv)效应子结构域。

11.如权利要求10所述的载体，其中该胞外受体结构域包含通过接头结构域连接的可变免疫球蛋白轻链结构域和可变免疫球蛋白重链结构域。

12.如权利要求11所述的载体，其中该接头结构域是(G4S)_x(SEQ ID NO:24)，其中x是从1至100的整数。

13.如权利要求10所述的载体，其中该胞外受体结构域是单链可变片段(scFv)。

14.如权利要求1至8中任一项所述的载体，其中该细胞表面受体是T细胞受体。

15.如权利要求10所述的载体，其中该胞外受体结构域是抗CD19单链可变片段(scFv)。

16.如权利要求10所述的载体，其中该嵌合抗原受体是抗CD19-41BB-CD3ζ。

17.一种制备转基因哺乳动物宿主细胞的方法，该方法包括将如权利要求1至16中任一项所述的载体引入哺乳动物宿主细胞中。

18.如权利要求17所述的方法，其中该哺乳动物宿主细胞是免疫细胞。

19.如权利要求18所述的方法，其中该免疫细胞是自然杀伤(NK)细胞、单核细胞/巨噬细胞或树突细胞。

20.如权利要求18所述的方法，其中该免疫细胞是T细胞。

21.如权利要求20所述的方法，其中该T细胞进一步表达结合肿瘤抗原或病毒抗原的T细胞受体(TCR)。

22.如权利要求21所述的方法，其中该TCR是内源的。