[发明专利]蛋白质和细胞的聚糖分析

权利要求书

1.一种用于对至少一个样品进行聚糖分析的方法，所述方法包括以下步骤：

提供具有用多种抗体点样的表面的基底；

在封闭溶液中孵育所述基底；

在至少一个样品中孵育所述基底，其中所述至少一个样品包含蛋白质溶液；

用酶促释放溶液对所述基底进行喷雾；以及

通过质谱扫描所述基底以检测和鉴定聚糖的存在。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一个样品包含至少一个细胞群。

3.根据权利要求2所述的方法，其中在用酶促释放溶液对所述基底进行喷雾的步骤之前将所述至少一个细胞群在固定和漂洗剂中孵育。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述固定和漂洗剂选自：福尔马林、卡诺氏溶液、多聚甲醛、基于乙醇的固定剂、和基于聚乙二醇的固定剂。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述基底是玻璃或塑料显微镜载玻片或多孔板。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述封闭溶液是血清。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述血清是在PBS和去污剂中的1％BSA。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述封闭溶液通过包括3×PBS浴和1×水浴的洗涤步骤去除。

9.根据权利要求1所述的方法，其中将所述至少一个样品在室温下在潮湿室中孵育两小时。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述酶促释放溶液包含PNGase F。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述质谱选自由以下各项组成的组：基质辅助激光解吸/电离成像傅里叶变换离子回旋共振(MALDI-FTICR)质谱、基质辅助激光解吸/电离飞行时间(MALDI-TOF)质谱、扫描微探针MALDI(SMALDI)质谱、红外基质辅助激光解吸电喷雾电离(MALD-ESI)质谱、表面辅助激光解吸/电离(SALDI)质谱、解吸电喷雾电离(DESI)质谱、二次离子质谱(SIMS)质谱和简易敞开式声波喷雾电离(EASI)质谱。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述扫描步骤之前是用MALDI基质材料对所述基底进行喷雾的步骤。

13.根据权利要求12所述的方法，其中MALDI基质溶液选自由以下各项组成的组：2,5-二羟基苯甲酸、α-氰基-4-羟基肉桂酸、芥子酸、1,5-二氨基萘和9-氨基吖啶。

14.根据权利要求1所述的方法，其中所述多种抗体特异性地结合选自由以下各项组成的组的蛋白质：A1AT、胎球蛋白-A、血液结合素、Apo-J、LMW激肽原、HMW激肽原、apo-H、转铁蛋白、IgG、IgM、IgA、纤连蛋白、层粘连蛋白、血浆铜蓝蛋白、腓骨蛋白、血管紧张素原、原纤维蛋白1、TIMP1、凝血酶敏感蛋白1、半乳糖凝集素-3结合蛋白、补体C1 R、丛生蛋白、半乳糖凝集素1、α-2-巨球蛋白、维生素D结合蛋白、富组氨酸糖蛋白、CD109、CEA、组织蛋白酶、AFP、GP73l及它们的组合。

15.根据权利要求13所述的方法，其中所述抗体可用于检测肝细胞癌的存在。

16.一种用于对至少一个细胞群进行聚糖分析的方法，所述方法包括以下步骤：

将至少一个细胞群粘附到基底表面，其中所述至少一个细胞群包含培养的或捕获的细胞；

固定和漂洗所述至少一个细胞群；

用酶促释放溶液对所述基底进行喷雾；以及

通过质谱扫描所述基底以检测和鉴定聚糖的存在。