[发明专利]多核苷酸合成方法、试剂盒和系统

权利要求书

1.一种合成具有预定序列的双链多核苷酸的体外方法，所述方法包括执行重复的合成循环，其中在每个循环中：

(A)通过平端连接反应中连接酶的作用，通过添加预定序列的第一核苷酸来延长双链多核苷酸的第一链；

(B)通过核苷酸转移酶或聚合酶添加预定序列的第二核苷酸，使与第一链杂交的双链多核苷酸的第二链延伸；以及

(C)然后在裂解位点裂解双链多核苷酸；并且

其中每个循环的预定序列的第一和第二核苷酸在裂解后保留在双链多核苷酸中。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，在每个循环中，所述第一核苷酸是所述第二核苷酸的配偶体核苷酸，并且其中，在合并到所述双链多核苷酸中时，所述第一和第二核苷酸形成核苷酸对。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述裂解位点由包含通用核苷酸的多核苷酸序列定义。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，在每个循环中，在延伸所述第二链之前，在所述双链多核苷酸中产生裂解位点。

5.根据权利要求4所述的方法，其中在步骤(A)期间，通过连接酶的作用，将通用核苷酸合并到所述双链多核苷酸的第一链中以定义所述裂解位点。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述第一核苷酸和所述通用核苷酸是多核苷酸连接分子的组分，并且其中，在步骤(A)中，在所述平端连接反应中，通过连接酶的作用，所述多核苷酸连接分子连接至所述双链多核苷酸，并且其中，当所述多核苷酸连接分子连接至所述双链多核苷酸时，所述双链多核苷酸的所述第一链被延伸并产生所述裂解位点。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，在给定的合成循环中，被添加至所述双链多核苷酸的所述第二链中的所述循环的所述第二核苷酸包括可逆终止子基团，所述可逆终止子基团阻止通过所述酶进一步延伸，并且其中，在下一循环的所述第二核苷酸的合成的下一循环中添加之前从所述循环的所述合并的第二核苷酸中移除所述可逆终止子基团。