[发明专利]处理核酸样本的方法

权利要求书

1.一种用于产生非天然存在的酶的方法，其包含：

a)在宿主中表达编码所述非天然存在的酶的异源序列，其中所述非天然存在的酶包含：

i)来源于非逆转录病毒转座子或来源于R2逆转录转座子的手指域；

ii)来源于R2逆转录转座子的拇指域；

iii)来源于R2逆转录转座子的手掌域；以及

iv)来源于R2逆转录转座子的核酸内切酶域；

b)从所述宿主纯化所述非天然存在的酶，由此产生所述非天然存在的酶。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述非天然存在的酶进一步包含融合物标签分子。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述融合物标签分子使所述非天然存在的酶稳定。

4.根据权利要求2所述的方法，其中所述融合物标签分子选自由以下组成的组：Fh8、MBP、NusA、Trx、SUMO、GST、SET、GB1、ZZ、HaloTag、SNUT、Skp、T7PK、EspA、Mocr、Ecotin、CaBP、ArsC、IF2-域I、IF2-域I衍生的标签、RpoA、SlyD、Tsf、RpoS、PotD、Crr、msyB、yjgD、rpoD和His6。

5.根据权利要求2所述的方法，其中所述融合物标签分子选自由以下组成的组：His标签、His6标签、钙调蛋白标签、CBP、CYD(共价但可解离的NorpD肽)、Strep II、FLAG标签、HA标签、Myc标签、S标签、SBP标签、Softag-1、Softag-3、V5标签、Xpress标签、Isopeptag、SpyTag、B、HPC(蛋白C重链)肽标签、GST、MBP、生物素、生物素羧基载体蛋白、谷胱甘肽-S-转移酶标签、绿色荧光蛋白标签、麦芽糖结合蛋白标签、Nus标签、Strep标签和硫氧还蛋白标签。

6.根据权利要求1所述的方法，其中来自R2逆转录转座子的所述手指域、R2逆转录转座子的所述拇指域或R2逆转录转座子的所述核酸内切酶域中的至少一个来源于节肢动物。

7.根据权利要求1所述的方法，其中来自R2逆转录转座子的所述手指域、R2逆转录转座子的所述拇指域或R2逆转录转座子的所述核酸内切酶域中的至少一个来源于蚕蛾。

8.根据权利要求1所述的方法，其中来自R2逆转录转座子的所述手指域、R2逆转录转座子的所述拇指域或R2逆转录转座子的所述核酸内切酶域中的至少一个来源于脊椎动物或棘皮动物。

9.根据权利要求1所述的方法，其中来自R2逆转录转座子的所述手指域、R2逆转录转座子的所述拇指域或R2逆转录转座子的所述核酸内切酶域中的至少一个来源于扁虫或水螅。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述非天然存在的酶具有与SEQ ID NO:1-20至少80％同一性。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述宿主选自细菌、酵母、藻类、蓝藻细菌、真菌或植物细胞或其任何组合。

12.根据权利要求1所述的方法，其中所述宿主为大肠杆菌。

13.根据权利要求1所述的方法，其中所述非天然存在的酶包含诱变基元-1序列。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述诱变基元-1序列与野生型序列相比具有改良的跳跃活性。

15.根据权利要求1所述的方法，其中所述非天然存在的酶包含诱变基元0序列。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述诱变基元0序列与野生型序列相比具有改良的跳跃活性。