[发明专利]肽大环化酶

说明书

一种具有由SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列或其突变序列的肽环化酶，或一种具有由编码由SEQ ID NO:1表示的氨基酸序列或其突变序列的碱基序列所编码的氨基酸序列的肽环化酶；编码所述肽环化酶的DNA；一种用于产生所述肽环化酶的方法；以及用于使用所述肽环化酶产生环肽的方法。

技术领域

本发明涉及能够产生大环肽的肽环化酶，用于产生所述酶的方法以及用于使用所述酶产生环肽的方法。

背景技术

大环化合物可赋予化合物空间构象的固定、对生物降解酶的抗性等，并且为特别是在从天然产物衍生的生理活性物质和药物中通常存在的结构特征。然而，用于通过有效地连接以1:1的比率存在于分子中且彼此远离定位的官能团来使肽环化的常规有机合成方法非常有限(参见非专利文献1)。寻找有效的环化方法为合成有机化学中尚未解决的问题之一。

引文列表

非专利文献

非专利文献1：C. J. White, A. K. Yudin, Nature Chem. 2011, 3, 509-524

发明概述

本发明要解决的问题

本发明要解决的问题为寻找一种用于通过有效地连接以1:1的比率存在于分子中且彼此远离定位的官能团来使肽环化的方法。

解决问题的手段

本发明人为解决上述问题广泛地进行了研究，并发现衍生自放线菌(Actinomycetes)的肽环化酶能够有效地产生期望的大环肽，从而导致完成本发明。

也就是说，本发明提供以下(1)-(7)。

(1) 一种肽环化酶，其包含：

(a) 如SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列，

(b) 与如SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列具有35%或更多同一性的氨基酸序列，或

(c) 其中缺失、取代、插入或添加1至数十个氨基酸残基的如SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列。

(2) 一种肽环化酶，其包含由DNA编码的氨基酸序列，所述DNA含有：

(a) 如SEQ ID NO: 2所示的核苷酸序列，或

(b) 在严格条件下同与如SEQ ID NO: 2所示的核苷酸序列互补的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。

(3) 一种DNA，其包含：

(a) 编码如SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列的核苷酸序列，

(b) 编码与如SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列具有35%或更多同一性的氨基酸序列的核苷酸序列，

(c) 编码其中缺失、取代、插入或添加1至数十个氨基酸残基的如SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列的核苷酸序列，或

(d) 在严格条件下同与编码如SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列的核苷酸序列互补的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。

(4) 一种DNA，其包含：

(a) 如SEQ ID NO: 2所示的核苷酸序列，或

(b) 在严格条件下同与如SEQ ID NO: 2所示的核苷酸序列互补的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。

(5) 一种包含(3)或(4)中所述的DNA的载体。

(6) 一种用于产生肽环化酶的方法，其包括培养其中已经引入了(3)或(4)中所述的DNA或(5)中所述的载体的细胞，并然后从培养物中获得肽环化酶。

(7) 一种用于产生环肽的方法，其包括将(1)或(2)中所述的肽环化酶应用于底物肽。

发明效果