[发明专利]从复杂样品中分离核酸并去除抑制剂

权利要求书

1.一种从样品中分离核酸的方法，包括：

(a)使样品、样品的裂解物或裂解物的上清液、或者样品、裂解物或上清液的一部分与选自乙酸铵、硫酸铵、乙酸钾、乙酸钠、氯化钠、乙酸铯及其组合的一种或多种第一试剂以及选自氯化铝、乙酸铒(III)、氯化铒(III)、氯化钬、氯化铪(IV)、氯化锆(IV)及其组合的一种或多种第二试剂接触，得到混合物；

(b)将步骤(a)的混合物分离为固相和液相，其中一种或多种第二试剂主要位于固相中；以及

(c)从步骤(b)的液相中分离核酸。

2.如权利要求1所述的方法，其中第一试剂是乙酸铵，并且第二试剂是氯化铝。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中步骤(a)的混合物中的一种或多种第一试剂的总浓度为0.1～3M、例如0.1～0.25M、0.1～0.5M、0.1～1M、0.1～1.5M、0.1～2M、0.1～2.5M、0.1～3M、0.25～0.5M、0.5～1M、1～1.5M、1.5～2M、2～2.5M、2.5～3M、0.25～1M、0.25～1.5M、0.25～2M、0.25～2.5M、0.25～3M、0.5～1.5M、0.5～2M、0.5～2.5M、0.5～3M、1～2M、1～2.5M、1～3M、2～3M，优选为0.5～2.5M或1～2M。

4.如权利要求1～3中任一项所述的方法，其中步骤(a)的混合物中的一种或多种第二试剂的总浓度在1～150mM、例如1～5mM、5～25mM、25～50mM、50～75mM、75～100mM、100～150mM、1～25mM、1～50mM、1～75mM、1～100mM、1～150mM、5～50mM、5～75mM、5～100mM、5～150mM、25～75mM、25～100mM、25～150mM、50～100mM、50～150mM、75～150mM、优选5～25mM或5～50mM的范围内。

5.如权利要求1～4中任一项所述的方法，其中步骤(c)中分离的核酸包含DNA、RNA或两者。

6.如权利要求1～5中任一项所述的方法，其中样品是粪便样品、植物样品或环境样品，优选土壤、水或空气样品。

7.如权利要求1～6中任一项所述的方法，其中步骤(a)通过使样品、样品的裂解物或裂解物的上清液、或者样品、裂解物或上清液的一部分与包含一种或多种第一试剂以及一种或多种第二试剂的组合物接触来进行。

8.如权利要求1～7中任一项所述的方法，其中在使样品、样品的裂解物或裂解物的上清液与一种或多种第一试剂接触和使样品、样品的裂解物或裂解物的上清液与一种或多种第二试剂接触之间，不进行沉淀、离心或过滤。

9.如权利要求1～7中任一项所述的方法，其中步骤(a)包括：

(a)(1)使样品、样品的裂解物或裂解物的上清液与一种或多种第一试剂接触，以产生混合物；

(a)(2)将步骤(a)(1)的混合物沉淀、离心或过滤，得到液相；以及

(a)(3)使(a)(2)的液相与一种或多种第二试剂接触。

10.如权利要求1～9中任一项所述的方法，其中步骤(a)在裂解试剂的存在下进行。

11.如权利要求10所述的方法，其中裂解试剂包含离液剂，该离液剂选自硫氰酸钠、碳酸钠、硫氰酸铵、硫氰酸钾、硫氰酸锂、高氯酸锂、硫酸胍及其组合。

12.如权利要求10或11所述的方法，其中裂解试剂还包含一种或多种磷酸盐。

13.如权利要求12所述的方法，其中磷酸盐具有以下一个或多个特征：

a)其是磷酸氢盐；

b)磷酸盐中的阳离子部分选自铵、钠、钾或锂；

c)其是磷酸氢二钠。