[发明专利]定量PCR探针

说明书

本发明的课题为提供qPCR用探针等作为能够检测被移植或施予至人以外的动物的人细胞的新型手段。本发明的解决手段为定量PCR探针，其包含：序列，所述序列能与包含来自人LINE‑1基因的规定的碱基序列中的连续10～35个碱基的序列的寡核苷酸进行杂交；及标记部分。该定量PCR探针还可用于包含来自人LINE‑1的正向引物及来自人LINE‑1的反向引物(各序列处于规定的位置关系)的定量PCR试剂盒的制作等。

技术领域

本发明涉及定量PCR(聚合酶链式反应，polymerase chain reaction)(qPCR)探针、qPCR试剂盒、及使用了该试剂盒的检测方法。更详细而言，本发明涉及用于检测被移植至人以外的动物(代表性地，有啮齿类(小鼠、大鼠等)、兔、狗、绵羊、山羊、猪、牛、非人灵长类等，特别是非人灵长类、尤其是被分类为猕猴属的动物(例如食蟹猴))的人细胞的qPCR用探针、试剂盒及检测方法。

背景技术

[发明背景]

作为各种疾病治疗的一环，从来源于人的干细胞(例如iPS细胞(人工多能干细胞)、ES细胞(胚胎干细胞))经分化诱导而制作所期望的细胞或组织以移植至患者的再生医疗的研究开发正在持续进行。该研究开发中，在以人作为对象的临床试验之前，会实施以实验动物作为对象、移植从上述来源于人的干细胞分化诱导而得的细胞等的非临床试验(临床前试验)，此时所移植的来源于人的细胞在实验动物的生物体内呈现怎样的行为、并且/或者如何进行分布成为分析项目之一。作为非人灵长类之一的食蟹猴(Macacafascicularis)由于具有与人较为相似的基因组而在多个国家被用作这样的实验动物。

专利文献1中记载了一种检测试剂盒，其包含用于PCR的具有特定碱基序列的正向引物及反向引物，能够用于检测被移植至人以外的动物的人细胞的表达。另一方面，专利文献1的比较例中记载：即使使用扩增具有人特异性、在食蟹猴中不存在的DUF1220序列的引物和探针，在只有食蟹猴的检样中仍然观察到DNA的扩增，无法在食蟹猴中特异性地检测人细胞。

非专利文献1(图4等)中记载：LINE-1元件(基因)中存在包括Ta-1及Ta-0的Ta家族；该Ta家族对人是特异的(人的序列与类人猿、旧大陆猴、新大陆猴等的序列不同)；等等。然而，并非人与其近缘物种之间不同的碱基序列全部能作为qPCR用途的探针、正向引物及反向引物使用。非专利文献1只不过公开了Ta家族的碱基序列在进化过程中成为了对人具有特异性、与类人猿等有别的碱基序列，但完全没有记载Ta家族的碱基序列中的哪些部分适合作为qPCR用途的探针、引物。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2017-18011号公报

非专利文献

非专利文献1：Boissinot等，“LI(LINE-1)Retrotransposon Evolution andAmplification in Recent Human History”,Mol.Biol.Evol.17(6):915-928.2000.

发明内容

发明所要解决的课题

本发明的课题为提供能够检测被移植或施予至人以外的动物的人细胞的、qPCR用探针、试剂盒、检测方法等。

用于解决课题的手段

为了解决上述课题，本发明提供以下的[1]～[7]。

[1]

定量PCR探针，其包含：

序列，所述序列能与包含来自人LINE-1基因的序列号1所示的碱基序列中的连续10～35个碱基的序列的寡核苷酸进行杂交，或者