[发明专利]多核苷酸合成方法、系统和试剂盒

权利要求书

1.一种合成具有预定义序列的双股多核苷酸的体外方法，所述方法包括进行合成循环，其中每个循环包括裂解双股多核苷酸并且通过掺入核苷酸对来延伸裂解的双股多核苷酸，其中所述裂解的双股多核苷酸的第一股的末端通过添加预定义序列的核苷酸而延伸，并且与所述第一股杂交的所述裂解的双股多核苷酸的第二股的末端通过添加配偶体核苷酸而延伸，从而与所述第一股的掺入核苷酸形成核苷酸对。

2.根据权利要求1所述的方法，其中每个循环包括通过添加所述预定义序列的所述核苷酸连同连接的可逆封闭基团来延伸所述第一股，然后延伸所述第二股，其中在所述第二股被延伸之前或之后去除所述可逆封闭基团。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中在每个循环中，所述核苷酸被掺入裂解的支架多核苷酸中。

4.根据权利要求3所述的方法，其中每个循环包括：

(1)提供支架多核苷酸；

(2)在裂解位点裂解所述支架多核苷酸；

(3)通过核苷酸转移酶或聚合酶的作用将所述预定义序列的核苷酸添加到所述裂解的支架多核苷酸中，所述核苷酸包括阻止通过酶进一步延伸的可逆终止子基团；

(4)从所述预定义序列的所述核苷酸去除所述可逆终止子基团；并且

(5)将连接多核苷酸连接到所述裂解的支架多核苷酸，所述连接多核苷酸包括所述预定义序列的所述核苷酸的配偶体核苷酸，其中在连接之后，所述预定义序列的所述核苷酸与所述配偶体核苷酸配对。

5.根据权利要求4所述的方法，其中步骤(1)包括提供包括合成股和与其杂交的支持股的支架多核苷酸，其中所述合成股包括引物股部分，并且所述支持股包括通用核苷酸；其中步骤(2)包括在裂解位点裂解所述支架多核苷酸，所述位点由包括所述支持股中的所述通用核苷酸的序列定义，其中裂解包括裂解所述支持股并且从所述支架多核苷酸去除所述通用核苷酸；并且其中在步骤(5)中，所述连接多核苷酸包括支持股，所述支持股包括所述配偶体核苷酸和定义用于下一循环的裂解位点的通用核苷酸，并且其中所述连接多核苷酸连接到所述裂解的支架多核苷酸的所述支持股，从而形成所述核苷酸对。