[发明专利]用于核酸检测和定量的产品和方法在审
| 申请号： | 201980037046.1 | 申请日： | 2019-05-31 |
| 公开（公告）号： | CN112292459A | 公开（公告）日： | 2021-01-29 |
| 发明（设计）人： | M·莫斯可 | 申请（专利权）人： | 基纳生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6827 | 分类号： | C12Q1/6827 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人： | 李政璋;陶家蓉 |
| 地址： | 美国加利*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 核酸 检测 定量 产品 方法 | ||
1.一种用于检测一种或多种靶核酸存在、不存在或量的方法，其包括：
(a)将所述一种或多种靶核酸各自与寡核苷酸杂交，所述寡核苷酸包含对应靶核酸的部分的区域，由此生成杂交的寡核苷酸；
(b)使所述杂交的寡核苷酸与延伸组合物在延伸条件下接触，从而生成延伸的寡核苷酸，所述延伸组合物包含一种或多种链终止试剂；
(c)使(b)的产物与具有3'-5'外切核酸酶活性的酶接触，从而使未延伸的寡核苷酸被消化，而包含链终止试剂的延伸的寡核苷酸不被消化；和
(d)分析所述延伸的寡核苷酸，从而检测所述一种或多种靶核酸存在、不存在或量。
2.如权利要求1所述的方法，其中，至少一种链终止试剂在纳入(b)中寡核苷酸时阻断所述酶的3'-5'外切核酸酶活性。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中，至少一种链终止试剂是链终止核苷酸。
4.如权利要求3所述的方法，其中，所述链终止核苷酸在所述链终止核苷酸的戊糖部分的3'碳处被修饰。
5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中，至少一种链终止试剂是双脱氧核苷。
6.如权利要求5所述的方法，其中，所述双脱氧核苷酸选自：ddATP、ddGTP、ddCTP、ddTTP和ddUTP。
7.如权利要求3所述的方法，其中，所述链终止试剂是无环核苷酸。
8.如权利要求7所述的方法，其中，所述无环核苷酸选自：acyATP、acyCTP、acyGTP、acyTTP和acy-溴-UTP。
9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中，多种靶核酸在单一多重化反应中检测。
10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中，所述酶对单链DNA具有特异性。
11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中，所述酶的3'-5'外切核酸酶活性被双脱氧核苷酸或无环核苷酸抑制。
12.如权利要求11所述的方法，其中，所述酶来自嗜热栖热菌(Thermusthermophilus)。
13.如权利要求12所述的方法，其中，所述酶是TTHB178。
14.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中，所述延伸的寡核苷酸包含可检测标记物。
15.如权利要求1-14中任一项所述的方法，其中，至少一种链终止试剂是链终止核苷酸，并且所述终止核苷酸包含可检测标记物。
16.如权利要求14或15所述的方法，其中，所述可检测标记物是荧光标记物或染料。
17.如权利要求16所述的方法，其中，所述荧光标记物或染料通过电泳或实时PCR检测。
18.如权利要求14-17中任一项所述的方法，其中，所述可检测标记物是质量标记物。
19.如权利要求18所述的方法，其中，所述质量标记物是质量可区分标签，其位于对应所述靶核酸的部分的所述寡核苷酸的区域的5'处，或所述链终止试剂包含所述质量可区分标签。
20.如权利要求18或19所述的方法，其中，所述质量标记物的检测通过质谱进行。
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