[发明专利]在辐射灭菌过程中保护生物活性分子

说明书

本发明公开了涉及保护生物活性分子的生物活性免于辐射灭菌期间的辐射损害的组合物和方法，所述生物活性分子包括生物活性蛋白或生物反应调节剂，例如免疫反应调节剂。在喷雾干燥到免疫测定管的表面上的过程中，在示例性促有丝分裂凝集素制剂中包含至少一种辐射防护剂化合物(例如，半胱氨酸，还原型谷胱甘肽，褪黑素和/或组氨酸)，令人惊讶地保护了该凝集素的生物(促有丝分裂)活性免于由于电子束辐射灭菌而导致的损失。辐射防护剂化合物还可以保护其他生物活性分子并稳定其生物活性，从而使它们在辐射处理后的长时间保存后仍具有生物活性。

背景技术

技术领域

本实施方案总体上涉及体外生物学测定。更具体地，本公开涉及保存、保护和/或恢复和/或稳定生物活性分子的生物活性的组合物和方法，所述生物活性分子包括但不限于生物活性蛋白和/或生物反应调节剂，例如免疫反应调节剂，否则其活性在辐射灭菌期间和/或之后会受到损害和/或减弱。

相关领域描述

用于从患者获得的生物样品中存在的细胞(例如免疫系统细胞，例如，淋巴细胞，单核细胞，巨噬细胞，树突状细胞或免疫系统其他细胞)的免疫活性的体外测定是本领域众所周知的诊断方法和预后目的。例如，可以通过多种测量方法体外测试从此类样品分离的全血样品或白细胞，以评估免疫反应能力，例如细胞增殖，可溶性介体释放和/或响应丝裂原、特异性抗原或病原体相关分子模式(PAMP)、受体和其他激动剂的刺激的活化。

丝裂原包括已知刺激细胞有丝分裂的蛋白质，并用作免疫试剂以非抗原特异性方式诱导淋巴细胞增殖。淋巴细胞丝裂原可以是刺激淋巴细胞增殖和/或释放/分泌可溶性介体的多克隆激活剂，并且可以通过利用非抗原刺激驱动的淋巴细胞分子机制而绕过抗原特异性受体(免疫球蛋白(Ig)或T-细胞受体(TCR))引发强烈的多克隆反应，可以很容易地检测到。示例性T-细胞丝裂原包括生物活性蛋白植物血凝素(PHA)和伴刀豆球蛋白A(ConA)，它们是凝集素(例如植物来源的碳水化合物结合蛋白)。另一种凝集素，商陆丝裂原(PWM)能够刺激T细胞和B细胞。已经描述了来自多种来源的促有丝分裂凝集素(例如Shanmugham等人，2006Riv Biol.99:227；Naeem等人,2007Curr.Protein Pept.Sci 8:261；Singh等人,2014Crit.Rev.Microbiol.40:329)。某些与能激活信号转导的淋巴细胞表面分子特异性结合的抗体也可以用作丝裂原。

因此，通过引发/刺激在样品中容易测量的稳健的多克隆反应，丝裂原特别适用于评估含淋巴细胞的样品的总体免疫反应性，其中，由于信号强度低或抗原特异性反应淋巴细胞的频率低，单克隆或寡克隆反应的免疫检测可能不够灵敏。

例如，TB Gold丝裂原对照测定(例如，Mazurek等人,2005MMWRRecomm.Rep 54:49-55；Mazurek等人,2010MMWR Recomm.Rep.59:1-25；Simpson等人,2012Heart Lung 41:553；Cho等人,2012Tuberc.Respir.Dis.(Seoul)72:416；Woo等人,2014Clin.Chim.Acta 430:79)采用生物活性蛋白PHA(一种凝集素)作为多克隆丝裂原，以诱导强烈的体外T细胞反应，从而可以评估样品中T细胞的免疫反应状态。在该测试中，方便地以干燥形式提供PHA，作为在采血管的内表面上的涂层。通过在内表面上喷雾干燥含PHA的溶液，然后进行辐射灭菌(例如电子束辐射，γ射线辐照等)以杀死或灭活任何可能存在的微生物污染物，可以制备丝裂原涂覆的试管。使用化学物质代替辐射来达到无菌环境可能不是理想的，因为化学物质可能会在刺激过程中干扰细胞的生物活性和/或干扰其他检测系统。电子束辐射是本领域已知的用于对生物活性蛋白进行这种辐射灭菌的标准技术(例如，Smith等人,2016Health Phys.111(2增补2):S141；Silindir等人,2012PDA J PharmSci Technol.66:184；Mehta等人,1993Med Device Technol.4:24；Yaman,2001Curr.Opin.Drug Devel.4:760)。