[发明专利]通过羟基喹啉敏化的螯合物对激酶和/或磷酸酶的感测

说明书

本发明一般地涉及负责磷酸化调节的酶的测定，所述酶包括激酶(例如介导蛋白质和肽磷酸化的蛋白激酶)和磷酸酶(例如介导蛋白质和肽去磷酸化的蛋白磷酸酶)。本发明的某些方面使用表现出螯合增强发光的镧系元素离子，例如铕离子。通过激酶对肽进行磷酸化可引起镧系元素离子、磷酸根基团和报道基团(例如羟基喹啉)之间形成络合物，其在络合状态下时导致发光。因此，在某些实施方案中，对发光的测定可指示激酶活性。某些实施方案还包括使用底物以检测磷酸酶活性，其中去磷酸化导致信号测定的损失。另一些方面一般地涉及用于制备和使用这样的肽或络合物的技术、包含这样的肽或络合物的套件等。

相关申请

本申请要求2018年3月12日提交的Imperiali，et al.的标题为“Kinase and/orPhosphatase Sensing Via Hydroxyquinoline-Sensitized Chelates”的美国临时专利申请序列号62/641,587的权益，其通过引用整体并入本文。

技术领域

本发明一般地涉及负责磷酸化调节(phosphoregulation)的酶的测定，所述酶包括激酶(例如介导蛋白质和肽磷酸化的蛋白激酶)和磷酸酶(例如介导蛋白质和肽去磷酸化的蛋白磷酸酶)。为清楚起见，所提供的描述通常集中于蛋白激酶以举例说明本发明的某些实施方案，但是应理解，在另一些实施方案中，可以使用磷酸酶。

背景技术

蛋白激酶参与细胞内调节的一些方面。蛋白激酶通常通过向某些氨基酸残基(例如丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸)添加磷酰基(磷酸化)来发挥作用。磷酸化通常通过改变酶活性、细胞位置或与其他蛋白质的缔合而导致目标蛋白质(底物)的功能性变化。蛋白激酶见于广泛多种的生物体，包括动物、植物和细菌中。蛋白质内磷酸化事件的检测通常是通过荧光进行的，但是由于背景荧光(例如在存在小分子有机化合物的大型文库的情况下)可能会很困难。因此，需要改进。

发明概述

本发明一般地涉及激酶，例如介导蛋白质和肽磷酸化的蛋白激酶的测定。在一些情况下，本发明的主题涉及相关的产品，针对特定问题的替代解决方案和/或一个或更多个系统和/或制品的多种不同用途。

在一个方面中，本发明一般地涉及组合物。在一组实施方案中，所述组合物包含肽，其具有包含以下结构的第一部分：

其中R¹、R²、R³、R⁴和R⁵中的每一个独立地为氢或-SO₂X，以使得R¹、R²、R³、R⁴和R⁵中的至少一个为-SO₂X，其中X为-OR’或-NR’R”，R’和R”各自独立地为氢或烷基，并且n为0或正整数；以及包含磷酸根基团的第二部分，其中第一部分的N和/或O以及第二部分的磷酸根基团通过镧系元素离子配位。

在另一组实施方案中，所述组合物包含溶液，其包含溶解的镧系元素离子和含有具有以下结构的部分的肽：

其中R¹、R²、R³、R⁴和R⁵中的每一个独立地为氢或-SO₂X，以使得R¹、R²、R³、R⁴和R⁵中的至少一个为-SO₂X，其中X为-OR’或-NR’R”，R’和R”各自独立地为氢或烷基，n为0或正整数，并且波浪线指示与肽的共价连接。