[发明专利]用于治疗骨病的基因治疗剂

权利要求书

1.一种分离的核酸，其编码：

(i)包含第一腺相关病毒(AAV)反向末端重复(ITR)或其变体的第一区域；和，

(ii)包含编码至少一个骨代谢调节剂的转基因的第二区域。

2.如权利要求1所述的分离的核酸，其中所述骨代谢调节剂是骨形成促进剂，任选地，其中所述骨形成促进剂选自由以下组成的组：促进成骨细胞和/或骨细胞功能或活性的蛋白、抑制破骨细胞功能的蛋白和抑制破骨细胞表达或活性的抑制性核酸。

3.如权利要求1所述的分离的核酸，其中所述骨代谢调节剂是骨形成抑制剂，任选地，其中所述骨形成抑制剂选自由以下组成的组：抑制成骨细胞和/或骨细胞功能或活性的蛋白、促进破骨细胞功能或活性的蛋白和抑制成骨细胞表达或活性的抑制性核酸。

4.如权利要求2所述的分离的核酸，其中所述转基因编码选自由以下组成的组的骨形成促进剂：甲状旁腺激素(PTH)、PTH相关蛋白(PTHrP)、去糖化酶DJ1、靶向骨硬化蛋白(SOST)的抑制性核酸、靶向schnurri-3(SHN3)的抑制性核酸、靶向组织蛋白酶K(CTSK)的抑制性核酸和靶向NF-κβ的受体激活剂(RANK)的抑制性核酸。

5.如权利要求3所述的分离的核酸，其中所述转基因编码选自由以下组成的组的骨形成抑制剂：骨硬化蛋白(SOST)、schnurri-3(SHN3)、组织蛋白酶K(CTSK)、靶向甲状旁腺激素(PTH)的抑制性核酸、靶向PTH相关蛋白(PTHrP)的抑制性核酸和靶向去糖化酶DJ1的抑制性核酸。

6.如权利要求1至5任一项所述的分离的核酸，其中所述转基因编码至少一种选自由dsRNA、siRNA、shRNA、miRNA和人工miRNA(amiRNA)组成的组的抑制性核酸。

7.如权利要求6所述的分离的核酸，其中所述抑制性核酸的功能为突变的末端重复(mTR)。

8.如权利要求1至7任一项所述的分离的核酸，其中所述转基因包含SEQ ID NO:1-15或55-56中任何一个所示的序列。

9.如权利要求1至8任一项所述的分离的核酸，其进一步包含至少一个有效连接至所述转基因的启动子。

10.如权利要求1至9任一项所述的分离的核酸，其进一步包含含有第二AAV ITR或其变体的第三区域。

11.一种载体，其包含权利要求1至10任一项所述的分离的核酸，任选地，其中所述载体是质粒。

12.一种宿主细胞，其包含权利要求1至10任一项所述的分离的核酸或权利要求11所述的载体。

13.一种重组腺相关病毒(rAAV)，其包含：

(i)衣壳蛋白；和，

(ii)权利要求1至10任一项所述的分离的核酸。

14.如权利要求13所述的rAAV，其中所述衣壳蛋白具有选自以下的血清型：AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV6.2、AAV7、AAV8、AAV9、AAV.rh8、AAV.rh10、AAV.rh39、AAV.43、AAV2/2-66、AAV2/2-84和AAV2/2-125或前述任一种的变体，任选地，其中所述衣壳蛋白包含SEQ ID NOs:18-34中任一个所示的序列。

15.如权利要求14所述的rAAV，其中所述衣壳蛋白转导成骨细胞(OB)，任选地，其中所述衣壳蛋白具有选自AAV4、AAV1、AAV6、AAV6.2和AAV9或前述任一种的变体的血清型。