[发明专利]用于评估李斯特菌菌株的减毒和感染性的组合物和方法

权利要求书

1.一种评估测试李斯特菌菌株的减毒或感染性的方法，所述方法包括：

(a)用所述测试李斯特菌菌株感染分化的THP-1细胞，其中在用所述测试李斯特菌菌株感染之前，已将所述THP-1细胞分化为巨噬细胞；

(b)裂解所述THP-1细胞，并将裂解物平板接种在琼脂上；以及

(c)通过在所述琼脂上的生长来计数已在所述THP-1细胞内部繁殖的所述李斯特菌。

2.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括在步骤(a)之前，使用佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯(PMA)将所述THP-1细胞分化为巨噬细胞。

3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤(a)包括以1:1的感染复数(MOI)感染所述分化的THP-1细胞。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括在步骤(a)与(b)之间，杀死未被所述THP-1细胞摄取的李斯特菌。

5.根据权利要求4所述的方法，其中使用抗生素进行所述杀死，任选地其中所述抗生素是庆大霉素。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在感染后0小时进行步骤(b)。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在感染后3小时进行步骤(b)。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括比较所述测试李斯特菌菌株与野生型李斯特菌菌株和/或参考样品的摄取和细胞内生长。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述测试李斯特菌菌株是单核细胞增生性李斯特菌菌株。

10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述测试李斯特菌菌株是重组李斯特菌菌株，所述重组李斯特菌菌株包括有包括对融合多肽进行编码的第一开放阅读框的核酸，其中所述融合多肽包括与疾病相关型抗原肽融合的含PEST的肽。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述含PEST的肽是李斯特菌溶血素O(LLO)或其片段，并且所述疾病相关型抗原肽是人乳头瘤病毒(HPV)蛋白E7或其片段。

12.根据权利要求10或11所述的方法，其中所述重组李斯特菌菌株是减毒的单核细胞增生性李斯特菌菌株，所述减毒的单核细胞增生性李斯特菌菌株包括prfA的缺失或prfA中的失活突变，其中所述核酸位于附加型质粒中并且包括对D133V PrfA突变蛋白进行编码的第二开放阅读框。

13.根据权利要求10所述的方法，其中所述重组李斯特菌菌株是减毒的单核细胞增生性李斯特菌菌株，所述减毒的单核细胞增生性李斯特菌菌株包括actA、dal和dat的缺失或actA、dal和dat中的失活突变，其中所述核酸位于附加型质粒中并且包括对丙氨酸消旋酶或D-氨基酸氨基转移酶进行编码的第二开放阅读框，并且其中所述含PEST的肽是李斯特菌溶血素O(LLO)的N端片段。