[发明专利]新颖腺相关病毒（AAV）载体、具有降低的衣壳脱酰胺化的AAV载体及其用途

权利要求书

1.一种组合物，其包括重组腺相关病毒(rAAV)的混合群体，所述rAAV中的每个rAAV包括：

(a)AAV衣壳，所述AAV衣壳包括约60个衣壳vp1蛋白、vp2蛋白和vp3蛋白，其中所述vp1蛋白、所述vp2蛋白和所述vp3蛋白为：

vp1蛋白的异质群体，所述vp1蛋白由对所选AAV vp1氨基酸序列进行编码的核酸序列产生，

vp2蛋白的异质群体，所述vp2蛋白由对所选AAV vp2氨基酸序列进行编码的核酸序列产生，

vp3蛋白的异质群体，所述vp3蛋白由对所选AAV vp3氨基酸序列进行编码的核酸序列产生，

其中：所述vp1蛋白、所述vp2蛋白和所述vp3蛋白含有具有氨基酸修饰的亚群体，所述氨基酸修饰包括所述AAV衣壳中的天冬酰胺-甘氨酸对中的至少两个高度脱酰胺化的天冬酰胺(N)，并且任选地进一步包括包含其它脱酰胺化的氨基酸的亚群体，其中脱酰胺化引起氨基酸变化，条件是所述rAAV不是AAVhu68；以及

(b)所述AAV衣壳中的载体基因组，所述载体基因组包括核酸分子，所述核酸分子包括AAV反向末端重复序列和对产物进行编码的非AAV核酸序列，所述非AAV核酸序列可操作地连接到引导所述产物在宿主细胞中的表达的序列。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述脱酰胺化的天冬酰胺被脱酰胺化为天冬氨酸、异天冬氨酸、相互转化的天冬氨酸/异天冬氨酸对或其组合。

3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述衣壳进一步包括一种或多种脱酰胺化的谷氨酰胺，所述一种或多种脱酰胺化的谷氨酰胺被脱酰胺化为(α)-谷氨酸、γ-谷氨酸、相互转化的(α)-谷氨酸/γ-谷氨酸对或其组合。

4.根据权利要求1到4中任一项所述的组合物，其中所述衣壳包括天冬酰胺-甘氨酸对中的四到五个高度脱酰胺化的天冬酰胺。

5.根据权利要求1到5中任一项所述的组合物，其中所述衣壳包括在相对于AAV8或AAV9的编号的位置57处65％到100％脱酰胺化的天冬酰胺，如使用质谱测定的。

6.根据权利要求1到5中任一项所述的组合物，其包括：

(a)具有AAV8衣壳的rAAV，所述组合物进一步包括亚群体，在所述亚群体中，所述衣壳中的至少70％到100％的所述N在具有起始M的SEQ ID NO:6(经过编码的AAV8 vp1)的基于所述AAV8 vp1的编号的以下位置处被脱酰胺化：N57、N263、N385、N514和/或N540；

(b)具有AAV9衣壳的rAAV，所述rAAV进一步包括亚群体，在所述亚群体中，所述衣壳中的至少65％到100％的所述N在基于具有起始M的SEQ ID NO:7(经过编码的AAV9 vp1)的编号的以下位置处被脱酰胺化：N57、N329、N452和/或N512；

(c)具有AAVrh10衣壳(AAVrh10)的rAAV，所述rAAV进一步包括vp1、vp2和/或vp3的亚群体，所述vp1、vp2和/或vp3在基于具有起始M的SEQ ID NO:112(经过编码的AAVrh10 vp1)的编号的以下位置中的一个或多个位置处在所述N-G对处有至少70％到100％N脱酰胺化：N263、N385和/或N514，或者

(d)具有AAVhu37衣壳(AAVhu37)的rAAV，所述rAAV进一步包括vp1、vp2和/或vp3的亚群体，所述vp1、vp2和/或vp3在基于具有起始M的SEQ ID NO:36(经过编码的AAVhu37 vp1)的编号的以下位置中的一个或多个位置处在所述N-G对处有至少70％到100％N脱酰胺化：N263、N385和/或N514。