[发明专利]工程化细胞溶解性免疫细胞

权利要求书

1.工程化细胞溶解性免疫细胞，其包含：

i)可释放蛋白，其包含感兴趣的多肽(POI)和第一相互作用结构域；和

ii)保留蛋白，其保留在所述细胞的胞内区隔中，且包含与所述第一蛋白相互作用结构域结合的第二相互作用结构域，

其中所述第一蛋白相互作用结构域和第二蛋白相互作用结构域之间的结合被试剂的存在破坏，使得在不存在所述试剂的情况下，所述第一蛋白相互作用结构域和第二蛋白相互作用结构域结合，并导致POI保留在胞内区隔中；而在存在所述试剂的情况下，所述第一蛋白相互作用结构域和第二蛋白相互作用不结合，并且POI从所述胞内区隔释放并在所述细胞表面表达或由所述细胞分泌。

2.根据权利要求1的工程化细胞溶解性免疫细胞，其中在存在所述试剂的情况下，所述POI输出至所述细胞表面并在所述细胞表面表达。

3.根据权利要求1的工程化细胞溶解性免疫细胞，其中在存在所述试剂的情况下，所述POI由所述细胞分泌。

4.根据前述权利要求中任一项的工程化细胞溶解性免疫细胞，其中所述第一蛋白相互作用结构域和所述第二蛋白相互作用结构域之间的结合被竞争性结合所述第一蛋白相互作用结构域或所述第二蛋白相互作用结构域之一的试剂破坏。

5.根据前述权利要求中任一项的工程化细胞溶解性免疫细胞，其中所述第一蛋白相互作用结构域和所述第二蛋白相互作用结构域之间的结合被所述试剂破坏，所述试剂以比所述第一蛋白相互作用结构域和所述第二蛋白相互作用结构域之间的相互作用更高的亲和力结合所述第一蛋白相互作用结构域或所述第二蛋白相互作用结构域之一。

6.根据权利要求1-5中任一项的工程化细胞溶解性免疫细胞，其中所述第一蛋白相互作用结构域或所述第二蛋白相互作用结构域之一包含Tet阻遏蛋白(TetR)或其变体，并且所述第一蛋白相互作用结构域或第二蛋白相互作用结构域中的另一个包含TetR诱导肽(TiP)或其变体，并且所述试剂选自四环素、强力霉素(doxycycline)、米诺环素或其类似物。

7.根据权利要求1至5中任一项的工程化细胞溶解性免疫细胞，其中所述第一蛋白质相互作用结构域或所述第二蛋白相互作用结构域之一是所述试剂的肽模拟物。

8.根据权利要求6的工程化细胞溶解性免疫细胞，其中所述第一或第二蛋白相互作用结构域之一是所述试剂的肽模拟物，并且所述第一或第二蛋白相互作用结构域中的另一个能够结合所述试剂和所述肽模拟物，其中所述蛋白相互作用结构域以比其结合所述试剂低的亲和力结合所述肽模拟物。

9.根据权利要求7或权利要求8的工程化细胞溶解性免疫细胞，其中所述第一或第二蛋白相互作用结构域之一包含抗体、单结构域抗体(sdAb)、VHH/纳米抗体、纳米抗体、亲合体(affibody)、纤连蛋白人工抗体支架、anticalin、affilin、DARPin、VNAR、iBody、affimer、fynomer、结构域抗体(DAb)、abdurin/纳米抗体、centyrin、alphabody或nanofitin，其能够结合所述试剂，且所述第一或第二蛋白相互作用结构域中的另一个是所述试剂的肽模拟物。

10.根据权利要求7或权利要求8的工程化细胞溶解性免疫细胞，其中所述第一或第二蛋白相互作用结构域之一是模拟米诺环素的肽，所述第一或第二蛋白相互作用结构域中的另一个是与米诺环素结合的VHH，并且所述试剂选自米诺环素、四环素、强力霉素或其类似物。

11.根据前述权利要求中任一项的工程化细胞溶解性免疫细胞，其中所述试剂是小分子。