[发明专利]生产香草醛的方法

权利要求书

1.一种表达系统，用于重组表达具有异丁子香酚氧化活性的多肽，该表达系统包含带有如下序列的单个核酸构建体：

a.核苷酸序列(A)，其编码具有酶促异丁子香酚氧化活性的多肽，和

b.至少一个核苷酸序列(B)，其编码至少一种辅助多肽，该辅助多肽单独地或协同地协助由所述核苷酸序列(A)编码的多肽的功能性表达；

其中所述表达系统提供了所述核苷酸序列(A)和(B)的共表达。

2.权利要求1的表达系统，其是单个多顺反子核酸构建体。

3.前述权利要求之一的表达系统，其中所述核苷酸序列(A)编码：

a.具有异丁子香酚氧化活性并且包含与SEQ ID NO:2具有至少70％序列同一性的氨基酸序列的多肽；或者

b.具有异丁子香酚氧化活性并且包含一种氨基酸序列的多肽，该氨基酸序列与SEQ IDNO:4具有至少70％的序列同一性，并且在选自T52，Q74，D440的氨基酸序列位置上包含至少一个突变，以及可选地在选自N120，T121，F281，M298和L470的氨基酸序列位置上包含至少一个另外的突变。

4.权利要求3的表达系统，其中具有异丁子香酚氧化活性的多肽是在选自SEQ ID NO:4的T52，Q74和D440的氨基酸序列位置上包含至少一个突变的突变多肽。

5.前述权利要求之一的表达系统，其中所述至少核苷酸序列(B)包括核苷酸序列(B1)和(B2)，其中

a.(B1)编码具有分子伴侣素活性的多肽，该多肽包含与SEQ ID NO:8具有至少70％序列同一性的氨基酸序列；和

b.(B2)编码具有分子伴侣素活性的多肽，该多肽包含与SEQ ID NO:10具有至少70％序列同一性的氨基酸序列。

6.具有异丁子香酚氧化活性的多肽，其包含与SEQ ID NO:4具有至少85％序列同一性的氨基酸序列，并且在选自T52，Q74，D440的氨基酸序列位置上包含至少一个突变，以及可选地在选自N120，T121，F281，M298和L470的氨基酸序列位置上包含至少一个另外的突变。

7.权利要求6的多肽，其是在选自SEQ ID NO:4的T52，Q74和D440的氨基酸序列位置上包含至少一个突变的突变多肽。

8.权利要求7的多肽，其中所述突变选自：

a.单突变体(T52X₁)，(Q74X₂)和(D440X₃)

b.双突变体(T52X₁，Q74X₂)，(T52X₁，D440X₃)和(Q74X₂，D440X₃)和

c.三突变体(T52X₁，Q74X₂，D440X₃)

其中

X₁是P，M或K；

X₂是H或A；且

X₃是N，A，C，E，F，G，H，I，K，L，M，Q，R，S，T，V，W或Y。

9.一种重组核酸，其包含编码权利要求6至8中任一项的多肽的核苷酸序列；或者包含与SEQ ID NO:3或5具有至少85％序列同一性的核苷酸序列，或其反向互补序列。

10.一种重组核酸构建体，其包含权利要求9的重组核酸或其反向互补序列。

11.一种表达载体，其包含：

a.权利要求1至5中任一项的重组表达系统所包含的单个核酸构建体，或其反向互补体；或者

b.权利要求9的重组核酸，或其反向互补序列；或者

c.权利要求10的重组核酸构建体，或其反向互补序列。