[发明专利]用于生物学表面的紫外激发显微术的方法

权利要求书

1.使样品染色用于通过紫外表面激发显微术系统检查的方法，所述方法包括：

(a)选择由一组预选比例的发荧光染色剂制成的混合荧光染料溶液，用于当溶解于预选体积的溶剂中时产生所述混合荧光染料溶液，所述溶液包含：

(i)至少以下发荧光染色剂：第一浓度的第一发荧光染色剂和第二浓度的第二发荧光染色剂，

(ii)所述第一发荧光染色剂的特征在于当通过所述紫外表面激发显微术系统经受第一波长的紫外光时的第一光发射光谱，所述第二发荧光染色剂的特征在于当经受所述第一紫外光源波长时的第二光发射光谱，其中所述第一发射光谱不同于所述第二发射光谱；和

(b)将用于紫外表面激发显微术检查的样品暴露于所述混合荧光染料溶液达预定的时间段，以使所述样品的特征染色；

其中所述所选的混合荧光染料溶液被配置成制备所述样品，用于在所述第一紫外光源波长下通过所述紫外表面激发显微术系统成像，使得与所述第一发荧光染色剂相关联的特征的所述光发射通过所述系统在第一强度下成像，并且与所述第二发荧光染色剂相关联的特征的所述光发射通过所述系统在第二强度下成像，其中所述第一强度和第二强度大致相同。

2.权利要求1所述的方法，其中所述所选的混合荧光染料溶液被配置成制备所述样品，用于通过所述紫外表面激发显微术系统成像，所述紫外表面激发显微术系统包含多通道传感器以检测通过显微镜物镜收集的所述光发射，其中所述多通道传感器的第一通道对所述第一发荧光染色剂光发射光谱比对所述第二发荧光染色剂光发射光谱更敏感，其中所述多通道传感器的第二通道对所述第二发荧光染色剂光发射光谱比对所述第一发荧光染色剂光发射光谱更敏感。

3.权利要求1所述的方法，其中所述溶剂是水基流体。

4.权利要求2所述的方法，其中所述第一强度和第二强度大致相同包括与所述第一发荧光染色剂相关联的特征的所述光发射的平均强度在与所述第二发荧光染色剂相关联的特征的所述光发射的平均强度的1/3-3倍范围内。

5.权利要求4所述的方法，其中所述第一染色剂浓度和第二染色剂浓度以及所述预定的时间段被配置成使得通过所述多通道传感器的所述第一通道记录的所述第一光发射强度与通过所述多通道传感器的所述第二通道记录的第二光发射强度大致相同。

6.权利要求4所述的方法，其中所述第一染色剂浓度和第二染色剂浓度、所述预定的时间段以及所述紫外光源波长和强度被配置成使得通过所述多通道传感器的所述第一通道记录的所述第一发荧光染色剂光发射强度与通过所述多通道传感器的所述第二通道记录的第二发荧光染色剂光发射强度大致相同。

7.权利要求6所述的方法，其中所述第一染色剂浓度和第二染色剂浓度、所述预定的时间段以及所述紫外光源的波长发射光谱被配置成使得通过所述多通道传感器的所述第一通道记录的所述第一光发射强度与通过所述多通道传感器的所述第二通道记录的第二光发射强度大致相同。

8.权利要求3所述的方法，其中所述预选比例的发荧光染色剂的组包含粉末形式并且被配置成使不同的细胞隔室染色。

9.权利要求8所述的方法，其中所述预选比例的发荧光染色剂的组包含粉末形式的曙红染料和粉末形式的Hoechst染料，其中以重量计，所述曙红染料的量在所述Hoechst染料的量的约1-10倍范围内。

10.权利要求9所述的方法，其中所述显微术系统的所述第一紫外光源波长包含260 nm至280 nm范围内的紫外光。

11.权利要求9所述的方法，其中所述显微术系统的所述第一紫外光源波长包含230 nm至370 nm范围内的紫外光。

12.权利要求9所述的方法，其中所述显微术系统的所述第一紫外光源波长包含250 nm至290 nm范围内的紫外光。