[发明专利]CRISPR相关蛋白反应性T细胞免疫

权利要求书

1.一种用于确定针对CRISPR相关蛋白，特别是针对Cas9或Cas12，更特别是针对SpCas9，或针对此类CRISPR相关蛋白的同源物的，T细胞介导的免疫的方法，该方法包括以下步骤

·提供从患者获得的包含T细胞的细胞制剂；

·在刺激步骤中，将所述细胞制剂接触

-分离的CRISPR相关蛋白多肽，特别是Cas9或Cas12多肽，更特别是SpCas9多肽，或此CRISPR相关蛋白的同源物，或

-多种肽，其中所述多种肽代表所述CRISPR相关蛋白多肽的，特别是所述Cas9或Cas12多肽的、更特别是所述SpCas9多肽的、或其同源物的，氨基酸序列，或

-细胞，包括CRISPR相关蛋白多肽，特别是Cas9或Cas12，更特别是SpCas9，或此类CRISPR相关蛋白的同源物，

在抗原呈递细胞存在下，特别是在自体外周血单核细胞存在下，

提供激活的T细胞；

·任选地，在所述刺激步骤的最后部分期间，向所述细胞制剂中加入细胞内蛋白转运抑制剂，特别是布雷菲德菌素A和/或莫能菌素；

·在检测步骤中，通过以下步骤检测所述激活的T细胞的一个或多个亚群

-将所述激活的T细胞与对激活的调节性T细胞特异的分子探针组接触，和/或

-将所述激活的T细胞与对激活的效应T细胞特异的分子探针组接触，

提供标记的激活的调节性T细胞和/或标记的活化的效应T细胞；

·在定量步骤中，测定所述标记的激活的调节性T细胞的数目和所述标记的激活的效应T细胞的数目，和任选地，测定所述标记的激活的调节性T细胞的数目与所述标记的激活的效应T细胞的数目的比率(T_REG/T_EFF)。

2.一种用于确定编码能够特异性识别HLA呈递抗原的T细胞受体分子的核酸序列的方法，所述HLA呈递抗原源自CRISPR相关蛋白，特别是源自Cas9或Cas12蛋白、更特别是源自SpCas9蛋白、或源自此类CRISPR相关蛋白的同源物，所述方法包括以下步骤

·提供从患者获得的包含T细胞的细胞制剂；

·在刺激步骤中，将所述细胞制剂接触

-分离的CRISPR相关蛋白多肽，特别是Cas9或Cas12多肽，更特别是SpCas9多肽，或此类CRISPR相关蛋白的同源物，或

-多种肽，其中所述多种肽代表所述CRISPR相关蛋白多肽的氨基酸序列，特别是所述Cas9或Cas12多肽、更特别是所述SpCas9多肽、或其同源物，或

-细胞，包括CRISPR相关蛋白多肽，特别是Cas9或Cas12、更特别是SpCas9，或此类CRISPR相关蛋白的同源物，

在抗原呈递细胞存在下，特别是在自体外周血单核细胞存在下，

提供激活的T细胞；

·任选地，在所述刺激步骤的最后部分期间，向所述细胞制剂中加入细胞内蛋白转运抑制剂，特别是布雷菲德菌素A和/或莫能菌素；

·在分离步骤中，通过以下步骤分离所述激活的T细胞的一个或多个亚群

-将所述激活的T细胞与对激活的调节性T细胞特异的分子探针组接触，和/或

-将所述激活的T细胞与对激活的效应T细胞特异的分子探针组接触，

以及从所述制剂中除去CRISPR特异性调节性T细胞群和/或CRISPR特异性活化效应T细胞群；

·在序列测定步骤中，测定包含在所述CRISPR特异性T细胞群中的编码CRISPR特异性T细胞受体分子的一个或多个核酸序列。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中在权利要求1的检测步骤中或在权利要求2的分离步骤中，将细胞指定为激活的调节性T细胞，所述激活的调节性T细胞是

-对CD3、CD4、CD137和CD25呈阳性，其中CD25高表达，而对CD154呈阴性，且

-对FoxP3呈阳性和/或对helios呈阳性和/或对CD127呈阴性，

-并且任选地，对CD69、CD71、CD103、CD134、GARP、HLA-DR、IFNγ、IL-10、KLRG1、LAP、SATB1、TGFβ或TNFα中的任一种呈阳性。