[发明专利]细胞介导的外泌体递送

权利要求书

1.一种经基因修饰以产生嵌合多肽受体的细胞，所述嵌合多肽受体包含(i)细胞外识别结构域、(ii)至少一个蛋白酶切割位点和(iii)细胞内转录因子，其特征在于，所述细胞外识别结构域与其靶标的结合诱导所述至少一个蛋白酶切割位点发生蛋白水解切割并通过所述细胞内转录因子诱导编码基因产物的至少一种多核苷酸的内源性转录，所述基因产物包含至少一种外泌体多肽。

2.根据权利要求1所述的细胞，其特征在于，所述基因产物还包含目的蛋白。

3.根据权利要求2所述的细胞，其特征在于，所述目的蛋白是抗体、单链抗体或任何其他抗体衍生物、双特异性T细胞衔接子(BiTE)、受体、细胞因子如白介素、酶如胱天蛋白酶、粒酶、Cas、Cas9、检查点抑制剂、共刺激抑制剂、RNA结合蛋白、膜转运体如NPC-1、剪接因子、细胞器相关蛋白、溶酶体酶、转录因子、线粒体蛋白、细胞内蛋白、抗病毒蛋白、抗菌蛋白。

4.根据权利要求2-3中任一项所述的细胞，其特征在于，当所述目的蛋白是RNA结合蛋白时，所述细胞进一步经基因修饰以包含RNA货物分子，所述RNA货物分子选自由以下各项组成的组：mRNA、sgRNA、shRNA、miRNA、shRNA、siRNA、IncRNA、ncRNA、piRNA、piwiRNA、circRNA、tRNA、rRNA、crRNA及其任何组合。

5.根据前述权利要求中任一项所述的细胞，其特征在于，所述基因修饰是体外或离体基因修饰。

6.根据前述权利要求中任一项所述的细胞，其特征在于，所述细胞是效应免疫细胞。

7.根据权利要求5和/或6所述的细胞，其特征在于，所述细胞是T细胞、细胞毒性CD8+T细胞、CD4+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤(NK)细胞、B细胞、浆细胞、树突细胞(DC)、巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞、上皮细胞、内皮细胞、小胶质细胞、星形胶质细胞、神经元、干细胞、骨髓源性间充质基质细胞、脐带胶质源性MSC或任何其他细胞类型。

8.根据前述权利要求中任一项所述的细胞，其特征在于，所述嵌合多肽受体的细胞外识别结构域是抗体、抗体衍生物、单链片段、单链抗体、纳米抗体、肽、受体的配体、粘附分子、受体、白介素受体、细胞外基质组分或其任何组合。

9.根据前述权利要求中任一项所述的细胞，其特征在于，所述至少一个蛋白酶切割位点是S1、S2和/或S3切割位点中的至少一种。

10.根据前述权利要求中任一项所述的细胞，其特征在于，融合多肽是嵌合Notch多肽，所述嵌合Notch多肽从N末端至C末端包含以下且以共价连接：

(i)细胞外识别结构域，所述细胞外识别结构域不在Notch受体多肽中天然存在；

(ii)Notch调节区，所述Notch调节区包含Lin 12-Notch重复区、S2蛋白水解切割位点和跨膜结构域，所述跨膜结构域包含S3蛋白水解切割位点；

(iii)细胞内转录因子，所述细胞内转录因子与所述Notch调节区是异源性的，

其中所述细胞外识别结构域与其靶标的结合诱导所述S2蛋白酶切割位点和所述S3蛋白酶切割位点处发生切割，从而释放所述细胞内转录因子，所述细胞内转录因子激活所述多核苷酸的转录。

11.根据权利要求10所述的细胞，其特征在于，所述Notch调节区还包含异二聚结构域，所述异二聚结构域包含所述S2蛋白水解切割位点。

12.根据权利要求9-11中任一项所述的细胞，其特征在于，所述S1蛋白水解切割位点是弗林样蛋白酶切割位点，所述弗林样蛋白酶切割位点包含氨基酸序列Arg-X-(Arg/Lys)-Arg，其中X是任何氨基酸。