[发明专利]细胞团块融合方法

说明书

本发明提供使细胞团块融合的方法。一种细胞团块融合方法，包括将细胞团块接种在能与细胞黏附的表面上，从接种有细胞团块的面的表面侧及背面侧供给培养基并进行培养。

技术领域

本发明涉及使细胞团块融合的方法。

背景技术

生物体内的大部分的组织、内脏器官中存在血管系统，进行血液细胞、氧、营养等的供给，代谢废物等的除去。

近年来，通过在生物体外的细胞培养，建立了使用了肠、肝等各种上皮系的细胞的三维培养法(非专利文献1，2)，但这些为仅包含上皮细胞的类器官(organoid)，不含有血管结构。

接着这样的技术，开发了通过将内脏器官的前体细胞和血管内皮细胞，间充质细胞混合，在基质胶等基质上诱发自主性的细胞凝聚，由此制备具有微小血管网的类器官(内脏器官原基)的技术(非专利文献3，专利文献1)。

虽然能够通过使用低吸附板等以无基质条件制备细胞团块，主要由于营养和氧需求的问题，为了在内部不会引起坏死而进行长期培养，需要将细胞团块控制在几百μm以下的大小(非专利文献4)。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1：Nature 459，262-265，2009

非专利文献2：Cell 160，299-312，2015

非专利文献3：Nature 399，481-484，2013

非专利文献4：Br.J.Cancer(1986)，53，345-353

专利文献

专利文献1：WO2013/047639

发明概述

发明要解决的问题

为了制备φ为几百μm以上的类器官，需要使用基质，但由类器官周围的基质引起类器官之间的凝聚、融合受到抑制，难于将类器官扩大到5mm以上的尺寸。另外，根据GCTP的观点，基质的使用也是难于进行再生医疗等应用的原因之一。

本发明的目的在于提供以无基质条件制备大型类器官的方法。

用于解决问题的方法

本发明人通过在培养容器中以无基质条件(matrix-free)共培养内脏器官细胞和血管内皮细胞和间充质细胞，由此制备类器官(细胞团块)，将这些类器官接种在能与细胞黏附的表面上，从接种类器官的面的表面侧及背面侧供给培养基并进行培养，从而成功创造出任意大小的融合型类器官，完成了本发明。确认了该融合型类器官在内部形成血管网结构。另外，在融合型类器官中，多种内脏器官分化标记的基因表达上升了。在利用本发明的方法制备的融合型肝芽中，确认到肝功能相关基因的表达水平的上升，也确认到了毛细血管、细小动静脉，窦状隙，肝内胆管的形成。进而，确认了将融合型类器官移植至小鼠时，小鼠的血管系统与融合型类器官的血管系统的吻合、血液灌注。

本发明的主要内容如下。

(1)细胞团块融合方法，包括将细胞团块接种在能与细胞黏附的表面上，从接种有细胞团块的面的表面侧及背面侧供给培养基并进行培养。

(2)根据(1)所述的方法，包括以使得细胞团块相对于接种面所占的面积的比率为40～100％的方式将细胞团块接种在能与细胞黏附的表面上。

(3)根据(1)或(2)中所述的方法，其中，细胞团块包含血管细胞和/或间充质细胞。

(4)根据(3)所述的方法，其中，间充质细胞和血管细胞的比例为1∶0.01～100。

(5)根据(4)所述的方法，其中，间充质细胞和血管细胞的比例为1∶0.1～10。