[发明专利]寡核苷酸和核酸的合成

权利要求书

1.用于在固体基底表面上的多个位点处平行合成一个或多个寡核苷酸的方法，所述寡核苷酸是相同或不同的，其中该方法包括：

(i)为每个位点提供多个核苷或核苷酸(优选其中所述核苷酸是二核苷酸或三核苷酸)，其中每个核苷或核苷酸包含5’-OH保护基，并且其中所述核苷或核苷酸是在固体基底表面上固定化的；

(ii)在所述固体基底表面上的选定位点处，在所述核苷或核苷酸的5’-OH处进行热控制的脱保护，以在每个所述选定位点处形成具有脱保护的5’-OH基团的核苷或核苷酸；

(iii)在每个所述选定位点处，将以下偶联到所述脱保护的5’-OH基团上：核苷3’-亚磷酰胺或二核苷酸3’-亚磷酰胺或三核苷酸3’-亚磷酰胺，其中所述核苷3’-亚磷酰胺或二核苷酸3’-亚磷酰胺或三核苷酸3’-亚磷酰胺包含5’-OH保护基；并且将所得的亚磷酸三酯基团氧化为磷酸三酯基团；

(iv)在所述基底表面上选定位点处，在所述核苷或核苷酸的5’-OH处进行热控制脱保护，其中所述选定位点可与先前步骤的所述选定位点相同或不同，

(v)在每个所述选定位点处，将以下偶联到所述脱保护的5’-OH基团上：核苷3’-亚磷酰胺，或二核苷酸3’-亚磷酰胺，或三核苷酸3’-亚磷酰胺，其中所述核苷3’-亚磷酰胺或二核苷酸3’-亚磷酰胺或三核苷酸3’-亚磷酰胺包含5’-OH保护基，并将所得的亚磷酸三酯基团氧化为磷酸三酯基团；并且

(vi)重复步骤(iv)和(v)一次或多次，以在固体基底表面上的每个位点处获得期望的寡核苷酸。

2.根据权利要求1的用于在固体基底表面上的多个位点处平行合成一个或多个寡核苷酸的方法，所述寡核苷酸相同或不同，其中所述方法包括：

(i)为每个位点提供多个核苷，其中每个核苷包含5’-OH保护基，并且其中所述核苷在固体基底表面上固定化；

(ii)在所述固体基底表面上的选定位点处，在所述核苷的5’-OH处进行热控制的脱保护，以在每个所述选定位点处形成具有脱保护的5’-OH基团的核苷；

(iii)在每个所述选定位点处，将以下偶联到所述脱保护的5’-OH基团上：核苷3’-亚磷酰胺或二核苷酸3’-亚磷酰胺或三核苷酸3’-亚磷酰胺，其中所述核苷3’-亚磷酰胺或二核苷酸3’-亚磷酰胺或三核苷酸3’-亚磷酰胺包含5’-OH保护基；将所得的亚磷酸三酯基团氧化为磷酸三酯基团；

(iv)在所述基底表面上选定位点处，在所述核苷的5’-OH处进行热控制的脱保护，其中所述选定位点可与先前步骤的选定位点相同或不同，

(v)在每个所述选定位点处，将以下偶联到所述脱保护的5’-OH基团上：核苷3’-亚磷酰胺或二核苷酸3’-亚磷酰胺或三核苷酸3’-亚磷酰胺，其中所述核苷3’-亚磷酰胺或二核苷酸3’-亚磷酰胺或三核苷酸3’-亚磷酰胺包含5’-OH保护基，并将所得的亚磷酸三酯基团氧化为磷酸三酯基团；并且

(vi)重复步骤(iv)和(v)一次或多次，以在固体基底表面上的每个位点处获得期望的寡核苷酸。

3.根据权利要求1或权利要求2的用于在固体基底表面上的多个位点处平行合成一个或多个寡核苷酸的方法，所述寡核苷酸相同或不同，其中所述方法包括：

(i)为每个位点提供多个核苷，所述核苷包含5’-OH保护基，其中所述核苷在固体基底表面上固定化；

(ii)在所述固体基底表面上的选定位点处，在所述核苷的5’-OH处进行热控制的脱保护，以在每个所述选定位点处形成具有脱保护的5’-OH基团的核苷；

(iii)在每个所述选定位点处，将含有5’-OH保护基的核苷3’-亚磷酰胺偶联到所述脱保护的5’-OH基团上，并将所得的亚磷酸三酯基团氧化为磷酸三酯基团；

(iv)在所述基底表面上选定位点处，在所述核苷的5’-OH处进行热控制的脱保护，其中所述选定位点可与先前步骤的选定位点相同或不同，

(v)在每个所述选定位点处，将含有5’-OH保护基的核苷3’-亚磷酰胺偶联到所述脱保护的5’-OH基团上，并将所得的亚磷酸三酯基团氧化成磷酸三酯基团；并且

(vi)重复步骤(iv)和(v)一次或多次，以在固体基底表面上的每个位点处获得期望的寡核苷酸。

4.根据权利要求1、2或3中任一项的方法，其中步骤(i)的5’-OH-保护的核苷或核苷酸包含可热切割的5’-OH保护基。