[发明专利]产生天然杀伤细胞的方法和用于治疗癌症的组合物

权利要求书

1.一种扩增培养中的天然杀伤细胞的方法，其包括：

从血液样品中分离外周血单核细胞 (PBMC)；

从PBMC中分离CD56+细胞和/或CD3-/CD56+细胞中的至少一种；和

在至少两种细胞因子的存在下，将CD56+细胞和/或CD3-/CD56+细胞中的至少一种与饲养细胞的组合共培养；

其中所述饲养细胞的组合包括辐照的Jurkat细胞和辐照的Epstein-Barr病毒转化的淋巴细胞连续系(EBV-LCL)细胞，

其中所述至少两种细胞因子包括IL-2和IL-21。

2.权利要求1所述的方法，其中从所述PBMC中分离CD56+细胞和/或CD3-/CD56+细胞的至少一种通过使用CD56微珠和CD3微珠中的至少一种进行。

3.权利要求1所述的方法，其中所述至少两种细胞因子进一步包括选自由IL-15、Flt3-L、SCF、IL-7、IL-18、IL-4、I型干扰素、GM-CSF、IGF 1及其组合组成的组的一种或多种细胞因子。

4.权利要求1所述的方法，其中IL-2以50-1000 lU/mL的浓度添加。

5.权利要求1所述的方法，其中IL-21以10-100 ng/mL的浓度添加。

6.权利要求1所述的方法，其中辐照的Jurkat细胞和辐照的EBV-LCL细胞的比例是1:0.1-5或0.1-5:1。

7.权利要求1所述的方法，其中所述共培养包括共培养1-50天。

8.权利要求1所述的方法，其进一步包括：

在IL-2的存在下，将CD56+细胞和/或CD3-/CD56+细胞中的至少一种与所述饲养细胞的组合共培养第一周期；和

在IL-21的存在下，将CD56+细胞和/或CD3-/CD56+细胞中的至少一种与所述饲养细胞的组合共培养第二周期。

9.权利要求8所述的方法，其中在所述第二周期的第0-6天期间添加IL-21不止一次。

10.权利要求8所述的方法，其中在所述第二周期的第0-6天期间添加IL-21和所述饲养细胞的组合不止一次。

11.权利要求8所述的方法，其中在所述第二周期期间在每个十四天循环的前六天期间添加IL-21不止一次。

12.权利要求1所述的方法，其中将CD56+细胞和/或CD3-/CD56+细胞中的至少一种与所述饲养细胞的组合以CD56+细胞和/或CD3-/CD56+细胞和饲养细胞1:1-100的比例共培养。

13.通过权利要求1所述的方法制备的组合物。

14.一种扩增培养中的天然杀伤细胞的方法，其包括：

从血液样品中分离外周血单核细胞(PBMC)；

从PBMC中分离CD56+细胞和/或CD3-/CD56+细胞中的至少一种；和

在至少两种细胞因子的存在下，将CD56+细胞和/或CD3-/CD56+细胞中的至少一种与饲养细胞的组合共培养；

其中所述饲养细胞的组合包括辐照的Jurkat细胞和辐照的Epstein Barr病毒转化的淋巴细胞连续系(EBV-LCL)细胞，

其中所述至少两种细胞因子包括IL-2和IL-21，和

其中在培养的扩增期间间隔补充所述饲养细胞和所述细胞因子两者。

15.权利要求14所述的方法，其中从PBMC中分离CD56+细胞和/或CD3-/CD56+细胞中的至少一种通过使用CD56微珠和CD3微珠中的至少一种进行。