[发明专利]靶沉默技术的细胞内递送

权利要求书

1.一种基因工程化的EV，其包括泛素连接酶。

2.根据权利要求1所述的EV，其中所述泛素连接酶是E3泛素连接酶。

3.根据权利要求1-2中任一项所述的EV，其中所述E3泛素连接酶是TRIM连接酶或其结构域或区域，优选地TRIM21连接酶或其结构域或区域。

4.根据前述权利要求中任一项所述的EV，其中所述泛素连接酶与外泌体蛋白融合。

5.根据前述权利要求中任一项所述的EV，其中所述EV进一步包括至少一种抗体。

6.根据权利要求5所述的EV，其中所述抗体包括在与外泌体蛋白的融合蛋白中。

7.根据权利要求5所述的EV，其中所述抗体的Fc结构域通过在所述EV中包括的Fc结合多肽和/或通过所述泛素连接酶的Fc结合区结合。

8.根据权利要求5-7中任一项所述的EV，其中所述至少一种抗体的靶蛋白通过所述泛素连接酶的作用而降解。

9.根据前述权利要求中任一项所述的EV，其中所述EV进一步包括泛素缀合酶和/或泛素激活酶。

10.一种用于降解靶蛋白的方法，其包括以下步骤：(i)允许抗体结合其抗原，和(ii)借助于EV将泛素连接酶递送到所述抗体的附近。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述抗体还通过EV，任选地相同的EV递送。

12.根据权利要求10-11中任一项所述的方法，其中所述靶抗原是细胞内靶。

13.一种多肽构建体，其包括外泌体蛋白和泛素连接酶。

14.根据权利要求13所述的多肽构建体，其中所述泛素连接酶是E3泛素连接酶。

15.根据权利要求13-14中任一项所述的多肽构建体，其中所述E3泛素连接酶是TRIM21连接酶。

16.一种多核苷酸构建体，其编码根据权利要求13-15中任一项所述的多肽构建体。

17.一种载体，其包括根据权利要求16所述的多核苷酸构建体。

18.根据权利要求17所述的载体，其中所述载体选自包括以下的组：线性或环化的多核苷酸、环状DNA或RNA多核苷酸、质粒、小环、病毒、腺相关病毒、无衣壳病毒、mRNA、修饰的mRNA和/或合成的mRNA。

19.一种用于生产根据权利要求1-9中任一项所述的基因工程化的EV的方法，所述方法包括以下步骤：

(i)将至少一种根据权利要求16所述的多核苷酸构建体引入到EV产生细胞中；

(ii)在所述EV产生细胞中表达由所述至少一种多核苷酸构建体编码的至少一种多肽构建体；和，

(iii)获得由所述EV产生细胞产生的EV。

20.根据权利要求21所述的方法，其进一步包括在所述EV产生细胞中引入另一多核苷酸构建体并从其表达包括Fc结合多肽的多肽构建体。

21.根据权利要求20所述的方法，其中所述Fc结合多肽结合抗体。

22.根据权利要求25所述的方法，其中将至少一种抗体在溶液中外源性地添加至所述EV中或由所述EV产生细胞内源性地产生。