[发明专利]牙周疾病诊断方法、用途和试剂盒

说明书

公开了一种用于评估人类患者无牙周疾病、患有牙龈炎、患有轻度牙周炎、还是患有重度牙周炎的体外方法。该方法基于确定生物标志物蛋白质的见解。因此，在患者的唾液样品中测量蛋白质的浓度，该蛋白质是基质金属蛋白酶9(MMP‑9)和S100钙结合蛋白A8(S100A8)中的至少一项、α1‑酸糖蛋白(A1AGP)和丙酮酸激酶(PK)。基于所测量的浓度确定至少一个值，该至少一个值反映蛋白质的联合浓度。该至少一个值可以指示人类患者没有牙周疾病、患有牙龈炎、患有轻度牙周炎、或患有重度牙周炎的概率。该至少一个值可以与至少一个阈值进行比较，该至少一个阈值以相同方式反映与牙龈炎、轻度牙周炎或重度牙周炎相关联的联合浓度。该比较允许评估测试值是否指示患者的牙周健康状态。

技术领域

本发明属于口腔护理领域，并且涉及牙周疾病的基于唾液的诊断。特别地，本发明涉及用于区分健康牙龈、牙龈炎、轻度牙周炎以及重度牙周炎的状态的试剂盒、用途和方法。

背景技术

牙龈炎症或牙龈炎是一种主要由牙科细菌膜或牙菌斑附着到牙齿表面引起的非破坏性牙周疾病。如果不进行检测和治疗，可逆性牙龈炎通常会导致牙齿周围组织(即，牙周组织)发炎，这种情况被定义为牙周炎，这种情况是不可逆转的并且导致组织破坏和牙槽骨缺失，最终导致牙齿脱落。在牙龈疾病的进展期间，通常会有与其相关联的临床体征和症状，诸如牙龈肿胀、颜色由粉红色变为深红色、牙龈出血、口臭、以及牙龈变得越来越触痛或疼痛。

牙周炎是一种由口腔微生物引起的慢性多因素炎性疾病，其特征在于逐渐破坏硬组织(骨骼)和软组织(牙周膜)，最终导致牙齿活动和脱落。这与牙龈炎有所区别，牙龈炎是牙龈组织的可逆性感染和炎症。炎性牙周炎是最普遍的慢性人类疾病之一，并且是成年牙齿脱落的主要原因。除了牙周炎对口腔健康的重大负面影响之外，还有越来越多的证据表明，牙周炎具有全身性后果，并且是几种全身性疾病的风险因子，包括心脏病(例如，动脉粥样硬化、中风)、糖尿病、妊娠并发症、类风湿关节炎、以及呼吸道感染。

因此，从口腔健康和整体健康两者的角度出发，对牙周疾病进行早期准确的诊断很重要。

在一般的牙科实践中，牙周疾病的诊断仍然较差，导致治疗干预率相对较低以及还有大量未得到治疗的病例。当前诊断依赖于牙科专业人员对口腔组织状况(颜色、肿胀、探诊时出血程度、探诊牙周袋深度；以及口腔X射线造成的骨骼缺失)进行的不太精确的主观临床检查。这些传统方法很费时，并且所使用的技术中的一些技术(牙周袋深度、X射线)反映历史事件，诸如过去的疾病活动，而非当前的疾病活动或对其他疾病的易感性。因此，期望准确的更客观更快且更易于使用的诊断，优选地，该诊断还可以由非专业人员执行。因此，期望测量当前的疾病活动，还可能测量受试者对其他牙周疾病的易感性。

长期以来，唾液或口腔流体一直作为口腔和一般疾病的诊断流体，并且随着微型生物传感器(也称为芯片实验室)的出现，用于快速椅旁测试的护理点诊断获得了更大的科学和临床兴趣。尤其是对于牙周疾病的检测，与组织炎症和分解相关联的炎症生物标志物可能会由于邻近而容易在唾液中终止，这表明唾液具有用于牙周疾病检测的强大潜力。因此，实际上，该领域获得了极大的兴趣，并且已经出现了令人鼓舞的结果。例如，Ramseier等人(J Periodontol.2009年3月；80(3)：436-46)标识了与牙周疾病相关的宿主来源的生物标志物和细菌来源的生物标志物。然而，尚未出现确切测试。

生物标志物表示支持临床表现的生物学指标，因此是诊断牙周疾病的临床预后的客观度量。最终，可以利用经验证的生物标志物来评估未来疾病的风险，以便在最早阶段标识疾病，标识对初始治疗的反应，以及允许实现预防策略。

开发唾液生物标志物的护理点测试的先前限制包括缺乏适用于椅旁应用的技术以及无法分析各个样品中的多种生物标志物。此外，文献中也没有充分解决要在这种测试中包括哪些多种生物标志物的选择，也没有在实际测试中实现。