[发明专利]人工重组的染色体及其用途

权利要求书

1.一种产生包含一条或多条人工重组的染色体的细胞的方法，所述方法包括：

i)制备第一靶细胞和第二靶细胞，

其中，所述第一靶细胞包含第一靶染色体，并且所述第二靶细胞包含第二靶染色体，

此处，所述第一靶染色体包含第一部分、第一重组酶识别序列(第一RRS)和第一片段，其中，所述第一RRS位于所述第一部分和所述第一片段之间，

此处，所述第二靶染色体包含第二部分、第二重组酶识别序列(第二RRS)和第二片段，其中，所述第二RRS位于所述第二部分和所述第二片段之间；

ii)使用所述第二靶细胞产生一个或多个微细胞，

其中，所述一个或多个微细胞包含第二靶染色体或其片段，

此处，所述第二靶染色体的片段包含所述第二RRS和所述第二片段；

iii)使用所述第一靶细胞和所述一个或多个微细胞产生融合细胞，

其中，所述融合细胞包含所述第一靶染色体和所述第二靶染色体、或所述第一靶染色体和所述第二靶染色体的片段；以及

iv)通过用位点特异性重组酶(SSR)处理所述融合细胞来产生包含人工重组的染色体的细胞，

其中，所述SSR通过识别存在于所述第一靶染色体中的所述第一RRS和存在于所述第二靶染色体中的所述第二RRS的配对来诱导重组，

此处，通过重组将存在于所述第一靶染色体中的所述第一片段交换为存在于所述第二靶色体中的所述第二片段，

由此，产生具有所述第一部分和所述第二片段的第一人工重组的染色体。

2.如权利要求1所述的方法，其中，所述包含一条或多条人工重组的染色体的细胞进一步包含第二人工重组的染色体，

此处，所述第二人工重组的染色体包含所述第二部分和所述第一片段。

3.如权利要求1所述的方法，其中，所述第一部分包含位于所述第一靶染色体的两侧的端粒末端中的一个。

4.如权利要求3所述的方法，其中，所述第一片段包含位于所述第一靶染色体的两侧的端粒末端中的另一个。

5.如权利要求1所述的方法，其中，所述第二部分包含位于所述第二靶染色体的两侧的端粒末端中的一个。

6.如权利要求5所述的方法，其中，所述第二片段包含位于所述第二靶染色体的两侧的端粒末端中的另一个。

7.如权利要求1所述的方法，其中，所述第一RRS是选自loxP和loxP变体中的一种，

其中，所述第二RRS是选自loxP和loxP变体中的一种，

此处，所述第一RRS能够与所述第二RRS配对。

8.如权利要求7所述的方法，其中，所述SSR是Cre重组酶，

此处，所述SSR能够识别所述第一RRS和所述第二RRS。

9.如权利要求1所述的方法，其中，所述第一RRS是选自FRT、attP、attB、ITR及其变体中的一种，

其中，所述第二RRS是选自FRT、attP、attB、ITR及其变体中的一种，

此处，所述第一RRS能够与所述第二RRS配对。

10.如权利要求9所述的方法，其中，所述SSR是选自翻转酶(FLP)、整合酶和转座酶中的一种，

此处，所述SSR能够识别第一RRS和第二RRS。

11.如权利要求1所述的方法，其中，所述包含一条或多条人工重组的染色体的细胞可经历有丝分裂或减数分裂。

12.如权利要求1所述的方法，其中，包含所述第一人工重组的染色体的所述细胞不含所述第二靶染色体。