[发明专利]cAMP受体蛋白变体和使用其生产L-氨基酸的方法

说明书

提供了cAMP受体蛋白变体、包括该变体的微生物以及使用该变体生产L‑氨基酸的方法。

技术领域

本公开内容涉及cAMP受体蛋白变体、包括其的微生物以及使用其生产L-氨基酸的方法。

背景技术

CRP(环AMP受体蛋白)，也称为CAP(分解代谢物激活蛋白)，是大肠杆菌中最知名的转录调节子。CRP的特征在于具有碳源依赖性调节机制，其以“分解代谢物抑制”为代表。此作用由细胞内的环AMP(在下文中，称为“cAMP”)浓度触发。在优选碳源例如葡萄糖的存在下，腺苷酸环化酶的活性被抑制以降低cAMP，并且该信号抑制分解代谢基因的表达。在相反的情况下，腺苷酸环化酶的活性增加，结果是，阻遏物被抑制并且分解代谢基因的表达开始。此外，已知CRP起到多种作用，例如通过cAMP的细胞内信号传导、渗透调节、对细胞紧急情况的应答、生物膜生成、固氮、铁转运等。

据报道，已知大肠杆菌的418个基因受CRP调控，但是相应的机制尚未清楚地揭示(J Biol Eng.(2009)24；3：13)。拥有如此广泛的调节能力，CRP有可能通过突变显示多种表型。由于其优点，已经研究了CRP作为适合在细胞水平上重新设计菌株的靶标，其适用于多种环境。近来，已经进行了多种实验，例如通过生物信息学选择的CRP的氨基酸变体改变DNA结合的程度以调节改变基因表达的方法(Nucleic Acids Research，(2009)37：2493-2503)，通过使用由锌指DNA结合位点和CRP融合制备的人工转录因子(ATF)选择耐热、耐渗透和耐低温的大肠杆菌的方法(Nucleic Acids Research，(2008)36：e102)，等等。换句话说，由于CRP表达的变化促进下游基因表达的多种多样的变化，因此CRP可能是用于制备具有有用性状的微生物的良好工具。

发明内容

技术问题

本发明人已经开发出一种新颖的蛋白变体，其包括在SEQ ID NO：1的氨基酸序列中的一个或多个氨基酸取代，并且他们发现该蛋白变体可以提高L-氨基酸的生产率，从而完成本公开内容。

技术方案

本公开内容的目的是提供cAMP受体蛋白变体。

本公开内容的另一个目的是提供编码cAMP受体蛋白变体的多核苷酸。

本公开内容的甚至另一个目的是提供包括所述多核苷酸的载体。

本公开内容的甚至另一个目的是提供包括所述变体的埃希氏菌属的微生物。

本公开内容的甚至另一个目的是提供生产L-氨基酸的方法，该方法包括在培养基中培养埃希氏菌属的微生物。

本公开内容的甚至另一个目的是提供所述变体或包括所述变体的埃希氏菌属的微生物在L-氨基酸生产中的用途。

有利效果

当培养生产L-氨基酸的埃希氏菌属的微生物——该微生物包括本公开内容的cAMP受体蛋白变体——时，有可能高产量地生产L-氨基酸。因此，在工业方面，可以预期生产成本的降低以及生产的便利。

具体实施方式

以下将详细描述本公开内容。同时，在本公开内容中公开的每个描述和实施方式也可以应用于其他描述和实施方式。就是说，本公开内容中公开的多种元素的所有组合都落入本公开内容的范围内。进一步地，本公开内容的范围不受限于以下描述的具体描述。

为了实现以上目的，本公开内容的一个方面提供了cAMP受体蛋白变体，其包括在SEQ ID NO：1的氨基酸序列中的一个或多个氨基酸取代。具体地，本公开内容提供了cAMP受体蛋白变体，其包括在SEQ ID NO：1的氨基酸序列中的一个或多个氨基酸取代，其中该氨基酸取代包括谷氨酸取代从N-末端第196位上的氨基酸。更具体地，本公开内容提供了cAMP受体蛋白变体，其包括谷氨酸取代SEQ ID NO：1的氨基酸序列中第196位上的氨基酸。