[发明专利]一种酸法制备抗体药物偶联物中间体的方法及其应用

说明书

本发明提供了一种酸法制备抗体药物偶联物中间体的方法，它采用酸性添加剂，使得单甲基auristatin衍生物变成盐之后参与反应，酸性添加剂的加入能够显著的提高最终产物的产率，且酸的价格低廉，大大降低最终ADC产物的生产成本。除此之外，本发明提供的制备方法采用的是一步制备方法，除具有更高的终产物产率外，在生产中即节省了生产耗材、人工、设备、场地、原料等成本，也大大降低了产生的生产废液，降低了生产成本，提高了生产效率，适用于工业推广。

技术领域

本发明涉及抗体药物偶联物领域，具体涉及一种抗体药物偶联物中间体的制备方法及其在制备抗体药物偶联物中的应用。

背景技术

抗体偶联药物(Antibody-Drug Conjugate，ADC)作为一种新型的生物导弹，实现了单抗靶向作用和小分子药物细胞毒性的强强联合，现已成为肿瘤靶向治疗发展最快的领域之一。ADC的三个构件(抗体、细胞毒素和连接子)共同组成靶向药物递送系统，其中抗体实现靶向性，连接子保证在ADC在血液转运过程中的稳定性，而到达作用靶点后，毒素发挥对癌细胞的杀伤作用。

目前auristatin或maytansinoids是ADC开发中最广泛使用的两种有丝分裂抑制剂，它们能在长春碱结合位点附近与微管蛋白结合，引起G2/M细胞周期阻滞和随后的细胞凋亡。这种细胞杀伤机制在快速增殖的细胞中非常有效，但非分裂和静态细胞可能对药物作用不太敏感，导致产生耐药性，因肿瘤细胞分裂速度比大多数正常细胞更快，所以抗有丝分裂药物对癌细胞特别有效。由于这种固有的选择性，高效的微管蛋白抑制剂，如美登素和auristatin，已成功用作临床批准的ADC药物(brentuximabvedotin和trastuzumabemtansine等)。

海兔毒素(dolastatin)是从印度洋生物截尾海兔中发现的一类具有高细胞毒性的线性多肽类化合物，这类细胞毒药物能够显著抑制微管蛋白的形成和聚合。然而海兔毒素10在单独使用时存在毒副作用大、药代动力学性质差、治疗窗口窄等问题限制了其开发。Miyazaki等发现N端为仲胺的单甲基奥瑞他汀D(monomethyl auristatin D，MMAD)毒性与海兔毒素10相当，将这类N-单甲基取代的海兔毒素衍生物命名为奥瑞他汀类(auristatin)，它们可实现与连接子的有效连接，新一代的高效ADC也由此产生。目前，ADC研发常用的弹头分子为奥瑞他汀类化合物MMAE和MMAF(胡馨月,李艳萍,李卓荣.抗体药物偶联物的弹头分子研究进展[J].中国医药生物技术,2017(6):549-555.)。

MMAF(Monomethyl auristatin F)是海兔毒素10(dolastatin10，D10)的衍生物，可以抑制细胞有丝分裂，具有很强的抗肿瘤活性。目前已有多个处于临床阶段的ADC产品偶联的细胞毒分子即为MMAF，也是目前ADC中选择最多的一种单甲基auristatin衍生物。但是，这些小分子药物价格昂贵。

MMAF市场售价10mg的价格接近5000元，而用于偶联于抗体的中间体Mc-MMAF 1mg即接近6000元，从MMAF制备到Mc-MMAF中间体后的价格提升十多倍(MMAF、Mc-MMAF的价格可参见如下网址：https://www.medchemexpress.cn/mmaf-hydrochloride.html？src＝360-prod uct、https://www.medchemexpress.cn/McMMAF.html)。ADC中间体价格高昂是相关ADC生产成本高的一个重要因素。

相关ADC中间体(连接子-药物共价偶联物)价格相对于相应细胞毒分子价格急剧提升的一个重要原因是抗体药物偶联物中间体(即制备过程的收率较低。因此，提高相关ADC中间体的收率将能有效的控制ADC药物大规模生产时的成本。

Mc-MMAF结构如下所示：

Mc-MMAE结构如下所示：