[实用新型]同时检测肌钙蛋白及复合物的双标记试剂盒

说明书

本实用新型涉及同时检测肌钙蛋白及复合物的双标记试剂盒，属于免疫检测分析技术和纳米生物技术领域，在所述试剂盒中，包括集成在试剂条上的反应缓冲液、清洗液、增强液、包被cTnI单克隆抗体的磁微粒溶液、铕标记的cTnC单克隆抗体溶液和钐标记的cTnI单克隆抗体溶液，另附2‑6瓶不同浓度天然cTnI抗原(含cTnC)的冻干校准品。上述试剂盒可以提供一种接近均相的双标记反应体系，保证同时检测完整片段cTnI和cTnI‑C复合物的含量，缩短检测时间，提高了效率，为临床使用提供便利。

技术领域

本实用新型免疫检测分析技术和纳米生物技术领域，具体地说是同时检测肌钙蛋白及复合物的双标记试剂盒。

背景技术

心肌肌钙蛋白(cardiac troponin，cTn)是心肌肌肉收缩的调节蛋白。cTn是由三种不同基因的亚基组成：心肌肌钙蛋白I(cTn I)和肌钙蛋白C(TnC)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)。

cTn是以cTnI-C-T复合物和游离cTnI形式存在于心肌细胞中，心肌损伤时释放到血循环中后，cTnI-C-T可进一步分解为cTnI-C复合物和游离cTnT，而且 cTnI-C是其在血液中的主要形式。由于它们在正常血清中含量极微，在急性心肌梗死(AMI)时明显增高。当心肌细胞因缺血缺氧等因素遭破坏时，游离型cTnI 和cTnT可首先迅速从细胞中释放入血，随后结合于心肌结构蛋白中的结合型 cTnI和cTnT逐渐分解，缓慢释放入循环血中，AMI中，cTnI和cTnT在循环血中较早出现并能持续较长时间的原因。虽然肌钙蛋白半衰期很短(cTnT 2小时，游离cTnI 2h～5d)，但其从肌原纤维上降解的过程持续时间很长，可在血中保持较长时间的升高。所以在发病早期cTnI较多，而随着发病时间的持续，cTnI-C 占主导。

肌钙蛋白的测定主要采用双抗体夹心的免疫学方法。当对患者进行血液 cTnI定量检测时，根据检测试剂所使用的抗体的抗原表位不同，影响也不一样。血清中的单体cTnI分子极易降解，而在肌钙蛋白复合物中由于TnC的保护，cTnI 分子的中间区域更加稳定。因此，应优先使用识别cTnI分子中间稳定区域抗原表位的抗体。在心肌细胞中，cTnI以I-T-C的三元复合物形式存在。而在患者血液中，cTnI以I-C复合物形式而非I-T-C三元复合物形式存在。因此cTnI检测所使用的抗体识别cTnI-C复合物的能力对于检测至关重要。

cTnI分子最稳定的区域为30-110氨基酸区域。因为在坏死组织以及血液中，该区域受到了内源性cTnC的保护。由于缺乏cTnC的保护，cTnI的N端和C 端至少会发生部分截断，尤其是在临床表征发作的20小时之后。cTnI在血液中主要以cTnI-C的二元复合物形式存在。游离的cTnI仅微量存在。cTnC不会受到磷酸化影响，不易发生蛋白水解，对样本中的自身抗体和肝素也不敏感。这些特性均有助于提升检测系统的分析灵敏度、精密度和可重复性。因此，可使用识别cTnI-C复合物的抗体配对检测cTnI。因此同时检测完整片段cTnI及cTnI-C复合物对AMI发作时间具有一定的指导意义。

为此，本实用新型将双标记时间分辨荧光免疫分析技术与磁微粒相结合，提供了一种基于cTnI及cTnI-C复合物的双标记时间分辨荧光免疫分析试剂盒及其制备方法和检测方法，能够同时检测样品中的完整片段cTnI及cTnI-C复合物水平，具有更高的检测灵敏度和特异性，并达到了较佳的性能参数。

实用新型内容

本实用新型是通过下述技术方案实现的：

同时检测肌钙蛋白及复合物的双标记试剂盒，包括五个试剂条和一个试剂盒，所述试剂条放置于所述试剂盒内部，并且上下堆叠设置，所述试剂盒的内部中空，所述试剂盒的上设置有开口，所述试剂条上设置有把手、若干预留孔、若干清洗孔、一个增强液孔、一个检测孔、一个铕/钐标记物孔、一个反应缓冲液孔和一个磁微粒溶液孔，所述试剂条上包括有集成在上面的反应缓冲液、清洗液、增强液、包被cTnI单克隆抗体的磁微粒溶液、铕标记的cTnC单克隆抗体溶液和钐标记的cTnI单克隆抗体溶液。