[实用新型]试剂盒

说明书

本实用新型涉及生物检测领域，特别涉及一种试剂盒。本实用新型公开了一种新的AM79 EPSPS蛋白的定量检测试剂盒，通过原核表达获得重组AM79 EPSPS蛋白，将重组蛋白免疫小鼠，并通过筛选得到特异性的单克隆抗体，最终开发出定量检测AM79 EPSPS蛋白含量的酶联免疫定量检测试剂盒。该ELISA试剂盒，可定量检测AM79 EPSPS的蛋白。利用生产试剂盒，对实际样本进行检测。

技术领域

本实用新型涉及生物检测领域，特别涉及试剂盒。

背景技术

利用宏基因组学方法从受草甘膦污染的土壤中分离得到的抗除草剂的 EPSP合成酶(5-enolpyruvyl-shikimate-3-phosphatesynthase,EPSPS)是生物体内芳香族氨基酸——色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸生物合成过程中的关键性酶；草甘磷是通过抑制EPSP合成酶的活性而阻断芳香族氨基酸的合成最终导致受试植物死亡。但是某些细菌的EPSP合成酶的活性不被草甘膦所抑制，所以细菌EPSPS基因的表达可以使植物免受除草剂的伤害。将除草剂抗性基因 EPSPS转入大豆，旨在培育具抗草甘膦优良特性的转基因大豆，提高大豆生产中的田间除草效果，降低生产成本。

利用宏基因组学方法从受草甘膦污染的土壤中分离得到的抗除草剂的 EPSPS基因，构建了植物组成型表达载体pSOY19，由35S启动子驱动，可以为转基因植物提供草甘膦抗性。pSOY19质粒中只含有1种能在植物细胞中表达的基因：细菌EPSPS，位于CaMV 35S启动子的控制下。抗除草剂基因表达质粒为9557bp。插入序列EPSPS基因全长1321bp，编码一个含有440个氨基酸的多肽。通过农杆菌介导法，已将EPSPS外源基因转化大豆华春3号和Jack品种并获得转EPSPS基因的抗除草剂转基因大豆材料。

此前，对AM79 EPSPS检测多用常规的RT-PCR检测方法，操作繁杂、耗时长、成本较高、不能定量检测，只能定性判断，且不能高通量检测。

实用新型内容

有鉴于此，本实用新型提供了杂交瘤细胞及其产生的单克隆抗体在检测 AM79EPSPS蛋白中的应用，以及转基因蛋白AM79 EPSPS双抗体夹心ELISA 定量检测试剂盒，该试剂盒特异性好、灵敏度高、稳定性好，能够快速、简便、高效的定量检测转基因蛋白AM79EPSPS，成本低、适合高通量检测。

为了实现上述实用新型目的，本实用新型提供以下技术方案：

本实用新型提供了一种试剂盒，一种试剂盒，其特征在于，包括盒体(2)、盒盖(1)、以及所述盒体(2)与所述盒盖(1)之间的夹层(6)，还包括设置于所述盒体(2)的试剂孔(4)和试剂瓶(5)；所述试剂孔(4)下凹，与所述试剂瓶(5)的瓶底紧密配合；

所述夹层(6)设置有下凹板位，所述下凹板位分别与抗体预包被酶标板 (7)和操作说明书(8)紧密配合；

所述抗体预包被酶标板的抗体为鼠抗AM79 EPSPS单克隆抗体；所述鼠抗AM79EPSPS单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO：C201937的杂交瘤细胞制得；

所述试剂瓶至少有1个；所述试剂瓶分别装有待测物标准品、样品稀释液、显色剂、洗涤液、反应终止液、酶标抗体中的一种或多种。

在本实用新型的一些具体实施方案中，所述鼠抗AM79 EPSPS单克隆抗体的包被浓度为1.8～2.2μg/mL。

在本实用新型的一些具体实施方案中，所述酶标抗体为酶标记的兔抗 AM79EPSPS多克隆抗体；所述酶标记抗体的浓度为2μg/mL。

在本实用新型的一些具体实施方案中，所述酶标抗体的酶为辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶或β-半乳糖苷酶。

在本实用新型的一些具体实施方案中，所述样品稀释液为0.01mM、pH 值为7.4的PBS缓冲液。