[实用新型]一种转基因快速检测双联试纸卡

说明书

本实用新型提供一种转基因快速检测双联试纸卡,包括速测卡壳和卡壳内的试纸条，试纸条包括底板，粘着在底板上的样品垫，用于检测Bt‑Cry1Ab/Ac蛋白的部分还包括：依次相连的金标垫A、反应膜A和吸水垫A；用于检测CP4 EPSPS蛋白的部分还包括：金标垫B、反应膜B和吸水垫B；卡壳上设有加样孔、观察窗A和观察窗B。本实用新型具有特异性强、灵敏度高、稳定性好等优点。

技术领域

本实用新型属于生物工程领域，具体涉及一种转基因快速检测双联试纸卡,适用于同时检测Bt-Cry1Ab/Ac蛋白和CP4 EPSPS蛋白。

现有技术

苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis，Bt)是一种广泛存在于土壤中的革兰氏阳性菌，在芽抱形成时能产生一种具有特异性杀虫活性的杀虫晶体蛋白(lnsecticidalcrystal protein，ICPs)，该蛋白能特异性的杀死鳞翅目、鞘翅目、双翅目、膜翅目、同翅目等昆虫，以及动植物线虫、蜱螨等节肢动物。ICP常以内毒素形式存在，当昆虫摄食ICP 后，在昆虫消化道中肠消化酶的作用下，内毒素被降解成有毒的多肽，多肽分子与昆虫中肠上皮细胞上的特异受体结合，致使细胞膜产生穿孔，引起细胞肿胀裂解，使昆虫幼虫停止取食，最终导致死亡。Bt杀虫蛋白基因现已被广泛应用在植物基因工程及转基因育种中。Cry杀虫蛋白是Bt蛋白的一种，对鳞翅目等多种害虫具有较好毒杀作用，Cry1Ab/Ac基因已被应用于抗虫棉花、玉米等转基因作物。

EPSPS是广泛存在于微生物和高等植物中重要酶类，为植物生长所需的芳香族氨基酸的合成提供前提物质。草甘膦能抑制植物体内的EPSPS活性，从而致使植物死亡。来自根癌农杆菌CP4中的EPSPS由于对草甘膦表现出较好的抗性，使得CP4 EPSPS基因被广泛用于多种转基因作物中，如玉米、大豆等。

不过，随着人们对大健康要求的不断升高，人们对转基因作物的食用性及环境安全性问题也越来越关注，国际上许多国家已经开始要求对转基因产品进行检测以实行标识制度。而传统的检测方法如PCR、ELISA等虽然能够完成检测，但过程繁琐、费时费力，因此急需一种操作简便，时间较短的检测方法以满足快速检测的需要。

免疫胶体金技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、柠檬三钠等作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可通过静电结合与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合。胶体金标记技术是免疫层析快速诊断的核心技术，它以胶体金作为示踪标记物应用于抗原抗体反应。根据胶体金的高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应等特性，加上结合物的免疫和生物学特性，使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。

目前，将现有的免疫胶体金技术检测转基因产品的外源蛋白Cry1Ab/Ac和CP4EPSPS，仍然特异性差、灵敏度不高、生产成本高、逐个检测操作繁琐等问题，因此，亟需对现有免疫胶体金技术进行改进，研制特异性强、灵敏度高、稳定性好、重复性好、更加简便的能够同时快速检测转基因产品中外源蛋白Cry1Ab/Ac和CP4 EPSPS的新方法。

实用新型目的

本实用新型的目的是设计一种转基因免疫胶体金快速检测双联卡，用于同时快速检测杀虫晶体蛋白Bt-Cry1Ab/Ac和CP4 EPSPS的免疫胶体金速测卡。该速测卡特异性强、灵敏度高、稳定性好、操作简便、节时省力，适用于同时对转基因产品中Bt-Cry1Ab/Ac和CP4EPSPS蛋白的现场快速检测以及安全性评价。

实用新型内容