[发明专利]子宫内膜干细胞的定向成骨分化培养

说明书

本发明公开了一种子宫内膜干细胞的定向成骨分化培养方法，本发明人发现，1‑羟基‑4‑O‑鼠李糖‑2‑萘甲酸甲酯可以用于高效诱导子宫内膜干细胞成骨分化，但是在低剂量和鹿瓜多肽合用进行诱导，则可以诱导得到骨细胞。本发明的方法简便易行，成本低，在诱导10天就可以明确诱导为骨细胞，诱导效率非常高。

技术领域

本发明涉及一种子宫内膜干细胞的定向分化培养，属于干细胞培养技术领域。

背景技术

人子宫内膜是一个高度再生的组织，女性一生大约要经历子宫内膜400多个周期的脱落和再生。研究发现，子宫内膜这种巨大的再生能力被认为与人类子宫内膜干细胞有直接关系，受到越来越多学者的关注。目前，子宫内膜干细胞分类较为多样化，包括子宫内膜细胞侧群(side population，SP)、子宫内膜间充质干细胞、月经血来源的干细胞等，其中子宫内膜间充质干细胞因其数量较多，生物学特性明显人类子宫内膜是一种高度动态的组织，周期性地经历增殖期、分泌期、月经期，

具有显著的再生能力，能从月经后最初的0.5-1毫米长到5-7毫米。据文献报道，来源于子宫内膜组织的间充质干细胞不仅存在于基底层，经血中也存在。子宫内膜组织可全子宫切除术后标本、诊刮组织等中获取，即使绝经后期女性也可在无禁忌情况下应用雌激素刺激内膜生长来获取。hEMSCs因其显著的增殖能力、容易获取，成为构建组织工程韧带具有吸引力的、新的细胞来源。等受到更多关注。

本发明旨在提供一种子宫内膜干细胞的定向分化培养成骨细胞的方法，在骨组织修复工程上可能具有很大的应用潜力。

发明内容

本发明的目的是提供一种子宫内膜干细胞的高效定向分化培养成骨细胞的方法，在组织修复工程上可能具有很大的应用潜力。

鹿瓜多肽是鹿科动物梅花鹿(Cervus Nippon Temmick)的骨骼和葫芦科植物甜瓜(Cucumis melo L.)的干燥成熟种子，经分别提取后制成的灭菌水溶液。适用于风湿、类风湿性关节炎、骨折的早期愈合、骨关节炎、腰腿疼痛及创伤恢复等。该品为为淡黄色的澄明液体。

本发明人发现，1-羟基-4-O-鼠李糖-2-萘甲酸甲酯可以用于高效诱导子宫内膜干细胞成骨分化，但是在低剂量和鹿瓜多肽合用进行诱导，则可以诱导得到骨细胞。

本发明用到的成骨诱导液配方：DMEM低糖培养基+10％FBS+10-15μg/mL 1-羟基-4-O-鼠李糖-2-萘甲酸甲酯+20μg/mL鹿瓜多肽注射液+50μg/mL抗坏血酸。

本发明所需要解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现。

一种子宫内膜干细胞的高效定向分化培养成骨细胞的方法，其包括：

使用1-羟基-4-O-鼠李糖-2-萘甲酸甲酯和鹿瓜多肽进行诱导培养，1-羟基-4-O-鼠李糖-2-萘甲酸甲酯结构如下：

作为优选，本发明用到的成骨诱导液配方：DMEM低糖培养基+10％FBS+10-15μg/mL1-羟基-4-O-鼠李糖-2-萘甲酸甲酯+20μg/mL鹿瓜多肽注射液+50μg/mL抗坏血酸。

具体步骤如下：

hEMSCs的原代培养：