[发明专利]一种抗CK18单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种抗CK18单克隆抗体包含重链可变区的VHCDR1‑3和轻链可变区的VLCDR1‑3序列及其制备方法和在非酒精性脂肪肝病(NAFLD)检测中的应用，当cutoff值设250U/L时，用于诊断NAFLD的灵敏度72％，阴性预测值90％以上。还可应用于NAFLD评估模型。本发明成功获得鼠单克隆杂交瘤细胞株的基础上，测序并获得有效的抗体，应用该重组抗体制备定性或定量检测试剂盒具有性能稳定，定量准确等优点，能够实现对样本中CK18高灵敏度、高特异性快速检测。

技术领域

本发明涉及免疫学领域，尤其涉及一种抗CK18单克隆抗体及其应用。

背景技术

随着乙肝疫苗的普及，乙肝新发病人少见，而糖尿病、脂肪肝等富贵病发病率逐年上升。统计表明，我国非酒精性脂肪肝病(NAFLD)已占了肝病总数的50％。NAFLD与乙肝最大的病理区别在于前者肝细胞以凋亡为主，而后者是坏死。肝细胞坏死主要表现为血中肝酶上升，而肝细胞凋亡为主的肝病肝酶往往没有明显升高。因此临床上用肝酶诊断或评估肝细胞凋亡为主的肝病往往效果不佳，亟待一种灵敏度高的肝细胞凋亡特异性指标能弥补这一缺陷。

细胞角蛋白18(CK18)是细胞骨架蛋白的一种，除了起到细胞骨架的支撑作用以外，还通过多种途径参与着细胞内的各种反应。CK18作为肝细胞凋亡的指标，在包括非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的很多肝脏疾病中都有升高，并且与NAFLD患者肝细胞的脂肪变性、小叶炎症、气球样变的程度及纤维化程度相关，同时有中重度纤维化患者的血清CK18水平明显高于轻度或无纤维化患者的水平。

当细胞受到损伤性刺激发生凋亡时，多条途径被激活，同时激活了Caspase系统，Caspase在两个位点进行切割，这种形式的裂解是高度凋亡特异的，并且凋亡片段对蛋白酶体的降解作用稳定，能够释放进入血浆中。M30抗原位于CK18裂解片段中，且只在裂解片段能够暴露，因此，M30抗体对于上皮细胞的凋亡是具有特异性的。

细胞角蛋白18片段M65(CK18-M65)作为一个无创性的检测手段，在NAFLD的诊断、NAFL和HASH的鉴别及纤维化程度的判断上有重要临床价值。

因此，研制出一种抗CK18的单克隆抗体具有重要的意义。

发明内容

为了解决现有技术的问题，一方面，本发明提供了一种抗CK18单克隆抗体，所述抗CK18单克隆抗体包含重链可变区的VHCDR1-3和轻链可变区的VLCDR1-3；

VHCDR1：GGATACACATTCACTGAATACAGC

VHCDR2：ATAAATCCTAACAATGGTGGAACT

VHCDR3：GCAAACTAGGTTACGACGGTTTGCCTAC

VLCDR1：CAGAGCCTTGTTCACAGTAATGGAAACACCTAT

VLCDR2：AAAGTTTAC

VLCDR3：TCTCAAAGTACACATGTTCCGTGGACG。

作为本发明实施方式的进一步改进，所述VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NOs：1-3所示：

SEQ ID NO：1 GYTFTEYS

SEQ ID NO：2 INPNNGGT

SEQ ID NO：3 ANYGYDGFAY。

作为本发明实施方式的进一步改进，所述VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NOs：4-6所示：

SEQ ID NO：4 QSLFHRNGNTY