[发明专利]一种结合抗原A的单克隆抗体及应用其的检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种特异性结合甘露多糖的单克隆抗体的VHCDR1‑3和VLCDR1‑3序列及其制备方法以及在克罗恩病等疾病方面的应用。本发明克服了甘露多糖免疫原性低，不容易产生鼠抗等问题，在成功获得鼠单克隆杂交瘤细胞株的基础上，测序并重组获得有效的人‑鼠嵌合抗体，应用该重组抗体制备的抗酿酒酵母细胞抗体定性或定量检测试剂盒具有性能稳定，定量准确等优点。

技术领域

本发明涉及免疫学领域，尤其涉及一种结合抗原A的单克隆抗体及应用其的检测试剂盒。

背景技术

自身抗体检测是自体免疫性疾病诊断的重要依据之一，迄今已发现近千种与自体免疫性疾病相关的自身抗体，应用于临床诊断的有数百种，在已商品化的自身抗体检测试剂中，所用到的标准品通常取自筛选获得的患者阳性血清，由于阳性血清中的抗体浓度低，非常不稳定，无法达到作为标准品或质控品的质量保证。

对于容易获得鼠单抗的自身抗原，可以通过制备获得单克隆抗体，然后重组获得人源化自身抗体，一定程度上解决了自身抗体质控品稳定性及定量问题。但对于半抗原，特别是对于鼠类免疫原性较低的自身抗原来说，上述方法无法获得满意的自身抗体质控品和标准品。比如酿酒酵母细胞壁甘露多糖是包括自体免疫性小血管炎、克罗恩病等的自身抗原，商品化的抗酿酒酵母细胞壁甘露糖抗体检测试剂(ASCA)虽然有多种，有些用阳性血清作为质控品，有些甚至用非特异性的人免疫球蛋白IgG作为质控品。上述质控品只能作为判断阴性和阳性的参照，无法进行定量检测。

而且该方法不适用于对鼠、兔等动物免疫原性低的抗原，比如酿酒酵母细胞壁多糖。

因此，亟待一种人源抗体的制备方法及在自体免疫性疾病诊断中的应用。

发明内容

为了解决现有技术的问题，一方面，本发明提供了一种单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体为结合抗原A的单克隆抗体，A的结构式如下，

其中n3连接臂，R为偶联蛋白；

所述单克隆抗体包含重链可变区的VHCDR1-3和轻链可变区的VLCDR1-3；

VHCDR1：GGCTACACCTTTACTACCTACTGG

VHCDR2：ATTAATCCTACCATTGGTTATACT

VHCDR3：GCAAGATTGGGAAACTATAATAAGGGCTATGCTATGGACTAC；

VLCDR1：GAAAGTGTTGATAATTATGGCTTTAGTTTT

VLCDR2：GCTGCATCC

VLCDR3：CAGCAAAGTAAGGAGGTTCCGTGGACG。

作为本发明实施方式的进一步改进，所述VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NOs：1-3所示：

SEQ ID NO：1 ESVDNYGFSF

SEQ ID NO：2 AAS

SEQ ID NO：3 QQSKEVPWT。

作为本发明实施方式的进一步改进，所述VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NOs：4-6所示：

SEQ ID NO：4 GYTFTTYW；

SEQ ID NO：5 INPTIGYT；

SEQ ID NO：6 ARLGNYNKGYAMDY。

另一方面，本发明进一步公开了上述单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤之一：