[发明专利]针对蛋白标签Streptactin的人源单克隆抗体

说明书

本发明公开了一种针对蛋白标签Streptactin的人源单克隆抗体。通过筛选和基因改造后，所获抗体的特异性好、亲和力高、抗聚集性增强，适用于带有该标签的目的蛋白的纯化和检测。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地指一种针对蛋白标签Streptactin的人源单克隆抗体。

背景技术

Streptactin(氨基酸序列：WSHPQFEK(GGGS)₂GGSAWSHPQFEK)是一种常用的蛋白纯化和检测的标签，可加在目的蛋白的N末端或者C末端，用于目的蛋白的纯化和检测。目前已有的针对该序列的抗体均为动物来源的，但在检测方面存在特异性不好等问题，这里，我们利用人源Fab噬菌体展示文库，筛选到针对该标签的人源单克隆抗体，可用于含有该标签的蛋白的纯化和检测，提高检测的特异性等。

发明内容

本发明的目的在于克服上述缺陷，提供一种针对蛋白标签Streptactin的人源单克隆抗体。

为实现上述目的，本发明提供了一种针对蛋白标签Streptactin的人源单克隆抗体，其轻链序列如SEQ No.1所示，其重链序列如SEQ No.3所示。

上述针对蛋白标签Streptactin的人源单克隆抗体对应的碱基序列，其轻链序列如SEQ No.4所示，其重链序列如SEQ No.5所示。

本发明的有益效果：通过筛选和基因改造后，所获抗体的特异性好、亲和力高、抗聚集性增强，适用于带有该标签的目的蛋白的纯化和检测。

附图说明

图1-1为Tango对A1抗体氨基酸序列的易聚集区预测。

图1-2为Tango对突变后A8氨基酸序列的易聚集区预测。

图1-3为A1和A8的重链突变区域比较图。

图2为SDS-PAGE检测A8抗体图。

图3为ELISA分析A8抗体与含有streptactin标签的目的蛋白的结合图。

具体实施方式

以下结合附图和具体实施例对本发明作进一步的详细描述。以下实施例是在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。

实施例1：A1抗体序列的获得

按照已有的文献(Zhu Z,Dimitrov DS,Methods Mol Biol,2009)构建了人源Fab噬菌体展示文库，并基于该文库对含有Streptactin标签的蛋白进行了三轮的筛选，并通过单克隆phage ELISA，将其中的阳性克隆送测序，得到了A1候选克隆的碱基序列，并经氨基酸翻译软件(https://web.expasy.org/translate/)，得到了其氨基酸序列，轻链氨基酸序列如SEQ No.1所示，其重链氨基酸序列如SEQ No.2所示。

实施例2：利用Tango软件对获得的A1氨基酸序列进行优化

利用Tango软件(http://tango.crg.es/)对A1候选克隆的氨基酸序列进行易聚集区预测，发现其中存在较强的易聚集区域，如图1-1，因此对该区域进行点突变，得到A8抗体，其轻链氨基酸序列如SEQ No.1所示，其重链氨基酸序列如SEQ No.3所示，对应碱基序列，轻链如SEQ No.4所示，重链如SEQ No.5所示。突变后的氨基酸序列经Tango软件重新预测，发现该易聚集区被明显改善，如图1-2，1-3。

实施例3：293F细胞表达A8抗体并SDS-PAGE检测