[发明专利]测定血浆中氯吡格雷及其非活性代谢物浓度的HPLC-MS/MS方法

说明书

本发明公开了一种测定血浆中氯吡格雷及其非活性代谢物浓度的HPLC‑MS/MS方法，包括：储备液的制备；将储备液稀释成硫酸氢氯吡格雷工作液、CCAM工作液和内标工作液；正标准品的制备：取空白血浆，将所述硫酸氢氯吡格雷工作液和所述CCAM工作液加入到所述空白血浆中，获得校正标准品；质控样品的制备：取空白血浆，将所述硫酸氢氯吡格雷工作液和所述CCAM工作液加入到所述空白血浆中，获得质控样品；样品的检测分析。本发明所提供的方法，具有提取回收率高、无明显基质效应和稀释效应、快捷性、灵敏度高、精密度和准确度良好等优点。

技术领域

本发明涉及了临床血药浓度监测控制技术领域，具体的是一种测定血浆中氯吡格雷及其非活性代谢物浓度的HPLC-MS/MS方法。

背景技术

氯吡格雷，可用于预防和治疗因血小板高聚集引起的心、脑及其他动脉循环障碍疾病，如近期发作的脑卒中、心肌梗死和确诊的外周动脉疾病。为了保证药物进入人体后能达到有效的治疗浓度和避免不良反应，临床上通常需要监测药物浓度，结合病人病情等个体化给药剂量的调整，以提高药物疗效，减少毒副反应的发生。因此，采用准确、灵敏、快速的定量分析方法测定氯吡格雷及其非活性代谢物(Clopidogrel Impurity1，简称CCAM)在血浆中的浓度十分必要。

发明内容

为了克服现有技术中的缺陷，本发明实施例提供了一种测定血浆中氯吡格雷及其非活性代谢物浓度的HPLC-MS/MS方法，其具有灵敏度高、定量准确、检测时间短等优点。

本申请实施例公开了：一种测定血浆中氯吡格雷及其非活性代谢物浓度的HPLC-MS/MS方法，所述方法中采用氯雷他定和卡马西平-d8作为内标，所述方法包括以下步骤：

储备液的制备：用HPLC甲醇作为溶剂，分别将硫酸氢氯吡格雷、CCAM和氯雷他定加入HPLC甲醇中，配置得到硫酸氢氯吡格雷储备液、CCAM储备液以及氯雷他定储备液；

工作液的制备：用HPLC甲醇和水作为溶剂，将所述硫酸氢氯吡格雷储备液和所述CCAM储备液分别稀释，获得硫酸氢氯吡格雷工作液、CCAM工作液；用乙腈作为溶剂，将所述氯雷他定储备液和卡马西平-d8加入所述乙腈溶剂中，获得内标工作液；

校正标准品的制备：取空白血浆，将所述硫酸氢氯吡格雷工作液和所述CCAM工作液加入到所述空白血浆中，获得校正标准品；

质控样品的制备：取空白血浆，将所述硫酸氢氯吡格雷工作液和所述CCAM工作液加入到所述空白血浆中，获得质控样品；

样品的检测分析：取96孔板，在所述96孔板上做标示，并向各个样品孔内加入对应的样品；向对应的样品中相应地加入内标工作液或乙腈以进行蛋白沉淀；对蛋白沉淀后的各样品进行离心作用，并分别提取上清液；在30℃下采用氮气将各上清液吹干，再向各上清液中加入复溶液；封板、涡旋均匀，然后进样分析。

具体的，所述复溶液为乙腈体积分数为25％的乙腈水溶液。

具体的，所述氯雷他定的浓度为20ng/mL，所述卡马西平-d8的浓度为4ng/mL。

具体的，所述方法中，液相色谱参数如下：

色谱柱：Xbridge C18 2.1*50mm，3.5μm，柱温为35℃；

流动相：包括流动相A和流动相B，所述流动相A为：甲酸体积分数为0.1％的甲酸水溶液，所述流动相B为：甲酸体积分数为0.1％的甲酸乙腈溶液；