[发明专利]一种许旺细胞的培养方法及其应用

说明书

本发明公开了一种许旺细胞的培养方法，其包括：培养过程中应用了环黄芪醇和异氟醚。其培养步骤如下：（1）许旺细胞的分离、纯化及原代培养；（2）许旺细胞的传代培养；（3）许旺细胞内神经生长因子的表达：当第3代细胞快长满细胞瓶底时，传代接种于25mL培养瓶中振荡培养5d，培养液为：质量分数为0.5‑0.8%的环黄芪醇的培养液，分开2次通入3小时含有3.0%异氟醚的混合空气。

技术领域

本发明涉及一种许旺细胞的培养方法及其应用，属于细胞培养技术领域。

背景技术

许旺细胞(Schwann cells)，由Theodor Schwann发现，形成将周边神经系统的神经元所伸出的轴突进行绝缘包覆，特点是有吞噬能力，可清除细胞残渣。许旺细胞(Schwann's cell)其出现在周围神经系统，形成髓鞘以将周边神经系统的神经元所伸出的轴突进行绝缘包覆，髓鞘不会包覆整个轴突，许旺细胞间会留有间隙，被称之为兰氏结，以跳跃式传导的方式使得神经讯号的传导速度得以加快。许旺细胞(Schwann's cell)具有吞噬能力，可清除细胞残渣，提供神经元重生的空间。

神经生长因子(nerve growth factor，NGF)是神经系统中最重要的生物活性因子之一，在周围神经损伤中具有促进神经细胞分化、决定轴突生长方向的作用。在一定条件下体外增殖培养的许旺细胞，可以合成分泌一定量的神经生长因子，但传统的培养方法细胞增殖缓慢，神经生长因子含量不高，极大的限制了神经生长因子在周围神经损伤修复中的临床应用。

本发明旨在提供一种许旺细胞的培养方法及其应用，具体为大幅提供徐旺细胞分泌神经生长因子(nerve growth factor，NGF)的能力，在制备神经损伤修复中治疗和预防药物上具有很大的应用前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种许旺细胞的培养方法及其应用，具体为大幅提供徐旺细胞分泌神经生长因子(nerve growth factor，NGF)的能力，在制备神经损伤修复中治疗和预防药物上具有很大的应用前景。

环黄芪醇(cycloastragenol，CAG)是从中药黄芪提取的主要皂苷成分，属于三萜皂苷类化合物，是黄芪甲苷的苷元。CAG具有免疫调节、抗炎、抗氧化、抗缺血性脑损伤、抗衰老等作用，例如：CAG通过抑制NLRP3炎性小体抑制炎症，预防小鼠心肌细胞纤维化；或通过抑制NF-κB活性作为炎症诱导的前列腺癌化学治疗的辅助治疗等。同时，CAG是中药提取化合物中现今唯一发现的端粒酶激活剂，能够有效激活神经元细胞的端粒酶活性，可以作为抑郁症的辅助治疗；或者通过影响端粒酶活性和klotho基因的表达延缓人胚胎肺成纤维细胞衰老，从而被认为具有抗衰老的作用。另外，有研究表明，高浓度(5、10、20μmol/L)CAG可抑制CON A诱导的T细胞活化、增殖；低浓度(1μmol/L)CAG会适度地延缓感染HIV病毒的人外周血来源的CD8+T淋巴细胞端粒的缩短，提高T细胞扩增的潜力。

通常认为，在接受异氟醚吸入麻醉处理之后，神经干细胞增殖受到显著抑制，也就是有明显的神经毒性，其对许旺细胞应该也有一定的毒性，具体研究目前尚未见报道。

本发明人发现，环黄芪醇具有微弱的促进许旺细胞分泌神经生长因子(nervegrowth factor，NGF)的功能；通入异氟醚会抑制许旺细胞分泌神经生长因子的能力。然而，通入微量异氟醚并联合使用环黄芪醇则会显著增加许旺细胞分泌神经生长因子(nervegrowth factor，NGF)的能力。

本研发团队首次研究了环黄芪醇和异氟醚对许旺细胞的生理活性，并发现联合使用可以用于刺激神经干细胞增殖。

本发明所需要解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现。

一种许旺细胞的培养方法，其包括：

培养过程中应用了环黄芪醇和异氟醚。

作为优选，其培养步骤如下：