[发明专利]一种竞争性均相化学发光检测方法及其应用

权利要求书

1.一种竞争性均相化学发光检测方法，其包括如下步骤：将被分析物与包含第一组合物和第二组合物的试剂、第三组合物及第四组合物相接触后形成待测混合物；提供激发光至少一次照射所述待测混合物；然后检测由此产生的化学发光信号强度，从而判断被分析物是否存在和/或被分析物的浓度；其中，

所述第一组合物包含第一受体以及与之结合的第一抗体或其结合片段，所述第一抗体或其结合片段是特异性结合被分析物的检测抗体；

所述第二组合物包含第二受体以及与之结合的第二抗体或其结合片段，所述第二抗体或其结合片段是特异性结合所述被分析物的检测抗体；

所述受体能够与单线态氧作用产生化学发光；

所述第三组合物包含与被分析物竞争结合所述检测抗体的竞争抗原，所述竞争抗原与特异性结合配对成员中的一员结合；

所述第四组合物包含可产生活性氧的供体，所述供体与特异性结合配对成员中的另一员结合；

所述第一抗体或其结合片段与被分析物特异性结合的亲和力高于所述第二抗体或其结合片段与被分析物特异性结合的亲和力；同时，

所述第一抗体或其结合片段与第一受体的质量比低于所述第二抗体或其结合片段与第二抗体的质量比。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一抗体或其结合片段与所述第一受体的质量比选自1:(100～1000)，优选选自1:(200～800)，更优选选自1:(300～600)。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述第一组合物在所述试剂中的浓度高于所述第二组合物在所述试剂中的浓度。

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其特征在于，所述第一组合物在所述试剂中的质量浓度与所述第二组合物在所述试剂中的质量浓度比为(2～50):1，优选为(2～25):1，更优选为(2～10):1。

5.根据权利要求1-4中任意一项所述的方法，其特征在于，所述第一组合物在所述试剂中的质量浓度为5～500ug/ml，优选为10～250ug/ml，更优选为15～200ug/ml。

6.根据权利要求1-5中任意一项所述的方法，其特征在于，所述第一组合物与所述第二组合物单独分散在同一种缓冲液中。

7.根据权利要求1-5中任意一项所述的方法，其特征在于，所述第一组合物与所述第二组合物混合后分散在一种缓冲液中组装成一种试剂。

8.根据权利要求1-7中任意一项所述的方法，其特征在于，所述第一受体和第二受体均为含有高分子聚合物载体的受体微球，且第一受体微球的平均粒径与第二受体微球的平均粒径相同。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述第一受体微球的平均粒径与所述第二受体微球的平均粒径相同。

10.根据权利要求1-9中任意一项所述的方法，其特征在于，所述被分析物为小分子抗原或半抗原。

11.根据权利要求1-10中任意一项所述的方法，其特征在于，所述竞争抗原为被分析物或被分析物类似物；优选为被分析物类似物。

12.根据权利要求1-11中任意一项所述的方法，其特征在于，先将被分析物与包含第一组合物和第二组合物的试剂、第三组合物接触，然后再向其中加入第四组合物。

13.根据权利要求1-12中任意一项所述的方法，其特征在于，将被分析物与包含第一组合物和第二组合物的试剂、第三组合物及第四组合物接触后，在30～40℃温育1～15min后形成待测混合物。

14.一种如权利要求1-13中任意一项所述的方法在化学发光分析仪中的应用。