[发明专利]一株分泌抗裂谷热病毒NSs蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用

说明书

本发明提供一株分泌抗裂谷热病毒NSs蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于生物技术领域。分泌抗裂谷热病毒NSs蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株2D6D10，其保藏编号为CCTCC NO：C2019269。本发明还提供所述杂交瘤细胞株分泌的抗裂谷热病毒NSs蛋白单克隆抗体及其在制备裂谷热病毒NSs蛋白抗体检测试剂盒方面的应用。本发明杂交瘤细胞2D6D10能够产生针对RVFV非结构蛋白NSs蛋白的单克隆抗体，该单克隆抗体具有阻断作用，因此本发明的阻断ELISA试剂盒可用于病毒感染与灭活疫苗或缺失疫苗免疫抗体的鉴别诊断。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种分泌抗裂谷热病毒NSs蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。

背景技术

裂谷热(Rift valley fever，RVF)是由裂谷热病毒(Rift valley fever virus,RVFV)引起反刍动物和人发病的人兽共患病。本病对反刍动物如绵羊、山羊、牛的影响较为严重，感染后出现疑似流感的症状，严重者导致怀孕母畜流产，在幼龄动物中有较高的死亡率。人对RVFV易感，可通过接触、处理感染性材料或通过蚊虫媒介叮咬感染，感染后可表现为疲劳、头痛、发热、肌肉关节疼痛、黄疸，甚至脑炎、出血热等，严重者可导致死亡。

裂谷热病毒(Rift Valley fever virus，RVFV)属于布尼亚病毒科白蛉病毒属，是一种负链RNA病毒，基因组包含三个节段：L、M、S。大片段(L)编码的RNA依赖性RNA聚合酶。中片段(M)主要编码囊膜糖蛋白。小片段(S)双义编码核衣壳蛋白N和非结构蛋白NSs。

裂谷热主要在西非和其他一些非洲国家呈地方性流行，在强降雨后牲畜和人群中周期性流行。2000年病毒被传播到阿拉伯半岛，引起沙特和也门的疫情大暴发，这也是该病第一次被传播到在非洲大陆以外的地方。我国于2016年报道首例输入性裂谷热病例。随着全球气候变暖、贸易及人员流动频繁，裂谷热传入的风险进一步增大。

目前已研制灭活疫苗和弱毒疫苗用于该病的免疫防控。但仍需建立特异的诊断方法，尤其是鉴别诊断技术用于该病的鉴别诊断。RVFV的实验室检测主要有ELISA、RT-PCR、病毒分离等，其中已报道以N蛋白为包被靶抗原的ELISA方法用于病毒抗体检测，但该方法无法区别感染抗体与免疫抗体。

发明内容

本发明的目的是提供一种分泌具有阻断作用的抗RVFV NSs蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

本发明的另一目的是提供所述杂交瘤细胞株分泌的抗裂谷热病毒NSs蛋白单克隆抗体。

本发明的再一目的是提供所述抗裂谷热病毒NSs蛋白单克隆抗体在制备裂谷热病毒NSs蛋白抗体检测试剂盒方面的应用。

本发明的目的采用如下技术方案实现。

分泌抗裂谷热病毒NSs蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株2D6D10，其保藏编

号为CCTCC NO：C2019269。

在本发明中，所述杂交瘤细胞株2D6D10分泌的抗裂谷热病毒NSs蛋白单克隆抗体。

在本发明中，所述抗裂谷热病毒NSs蛋白单克隆抗体在制备裂谷热病毒NSs蛋白抗体检测试剂盒方面的应用。

在本发明中，所述抗裂谷热病毒NSs蛋白单克隆抗体是将杂交瘤细胞2D6D10株注射到BALB/c小鼠腹腔，制备腹水，离心并收集腹水上清液，纯化后得到。

在本发明中，所述抗裂谷热病毒NSs蛋白单克隆抗体经HRP进行标记。

在本发明中，所述试剂盒还包括采用NSs蛋白包被的酶标板。

在本发明中，所述试剂盒还包括阴性对照血清、阳性对照血清、TMB底物液及终止液。