[发明专利]一种睾酮均相化学发光检测试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及一种睾酮均相化学发光检测试剂盒，其包括如下组分：第一组合物，其包含与睾酮特异性结合的检测抗体；第二组合物，其包含第一受体微球以及与之结合的第一抗原，所述第一抗原与睾酮竞争结合所述检测抗体；第三组合物，其包含第二受体微球以及与之结合的第二抗原，所述第二抗原与睾酮竞争结合所述检测抗体；所述第一抗原与所述检测抗体特异性结合的亲和力高于所述第二抗原与所述检测抗体特异性结合的亲和力；同时，所述第一抗原与第一受体微球的质量比高于所述第二抗原与第二受体微球的质量比。利用本发明所述试剂盒对睾酮进行检测时既有较高的功能灵敏度又有较宽的检测范围。

技术领域

本发明属于均相检测技术领域，具体涉及一种睾酮均相化学发光检测试剂盒及其应用。

背景技术

睾酮(testosterone,T)是体内最主要的雄性激素，血中的睾酮98％以结合形式存在，仅2％以游离形式存在。血清睾酮以3种形式存在：游离睾酮、弱结合睾酮(与清蛋白结合)以及紧密结合睾酮(与性激素结合球蛋白结合)。游离的睾酮才具有生物活性。男性睾酮几乎全部在睾丸间质细胞线粒体内合成。女性的卵巢可产生少量睾酮，其大部分来源于肾上腺皮质。检测男性体内睾酮含量可用于诊断睾酮产生不足的疾病，如性功能减退症、雌激素治疗、染色体异常(如Klinefelter综合征)等。许多严重的疾病(如肝、肾、心血管疾病)以及紧张、麻醉、某些药物都可引起睾酮水平降低。雄激素升高可引起女性男性化，检测女性体内睾酮含量有助于诊断雄激素综合征(AGS)、多囊卵巢综合症(PCOS)。血中的睾酮水平可有生理性波动和差异。

睾酮是小分子半抗原，单一抗原表位，需采用双抗原竞争性免疫分析模式，即待检睾酮和标记睾酮竞争限量抗体。目前现有的用于准确定量分析血清中睾酮的方法均属于非均相免疫分析。由于非均相免疫分析每次洗涤过程需要消耗时间，也必然由于洗涤分离带来“误差”。据文献报道，洗涤误差是非均相免疫分析误差的重要来源，影响分析方法的精密度，从而影响分析方法的准确度和灵敏度。此外，睾酮为小分子物质，如标记酶分子会对其免疫活性(结合抗体能力)产生影响。同时，竞争法要求两个抗原(待检抗原和标记抗原)对抗体的竞争能力相同或相似，才能形成均衡竞争方式。小分子睾酮与大分子酶结合，会造成空间位阻，影响与抗体分子的结合。

在竞争性免疫分析中，竞争抗原的用量直接关乎竞争性免疫分析的功能灵敏度。此外，在竞争性免疫分析中，选择合适特异性抗体和使用浓度同样至关重要。化学发光分析具有很好分析性能，分析特异性、分析灵敏度、自动化操作等较好满足临床要求。但是，针对睾酮的检测，对功能灵敏度和检测范围均有很高的要求，而现有化学发光免疫分析、电化学发光免疫分析、光激化学发光免疫分析等尚存在缺陷，不能有效兼顾功能灵敏度和分析范围的特殊要求。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供了一种睾酮均相化学发光检测试剂盒，利用该试剂盒检测睾酮时，同时具有优异的功能灵敏度和检测范围。

为此，本发明第一方面提供了一种睾酮均相化学发光检测试剂盒，其包括如下组分：

第一组合物，其包含与睾酮特异性结合的检测抗体；

第二组合物，其包含第一受体微球以及与之结合的第一抗原，所述第一抗原与睾酮竞争结合所述检测抗体；

第三组合物，其包含第二受体微球以及与之结合的第二抗原，所述第二抗原与睾酮竞争结合所述检测抗体；

所述第一抗原与所述检测抗体特异性结合的亲和力高于所述第二抗原与所述检测抗体特异性结合的亲和力；同时，

所述第一抗原与第一受体微球的质量比高于所述第二抗原与第二受体微球的质量比。

在本发明的一些实施方式中，所述第二抗原与第二受体微球的质量比为1:(10～200)，优选为1:(50～150)，更优选为1:(80～120)。