[发明专利]一种沙漠藻细胞组合物的培养方法

权利要求书

1.一种沙漠藻细胞组合物的培养方法，其特征在于：包括以下步骤：

Step.1取如下体积百分比的组分：沙漠集胞藻30％～60％，沙漠微囊藻10％～30％，沙漠绿囊藻10％～30％进行组合，组合后总体积百分比之和为100％；

Step.2培养液调配：取NH₄CI 0.4g，MgSO₄.7H₂O 0.156g，CaCI.H₂O 0.05g溶于去离子水，在温度121℃，经过20min灭菌，得到储备液A；取K₂HPO.3H₂O 0.142g，KH₂PO₄0.056g溶于去离子水中，采用022um滤膜过滤除菌，得到储备液B；取三羟甲基氨基甲烷2.42g，HCI 1.5ml，冰乙酸1ml，CH₃COONa.3H₂O 2g，10mol/l的NaOH 1.8ml溶于去离子水，在温度121℃，经过20min灭菌，得到储备液C；取储备液A10mL、储备液B1mL、储备液C10mL，混合后，用去离子水定容至1L，得到沙漠藻细胞组合物培养液；

Step.3(Na⁺，K⁺,Mg²⁺)离子浓度调整：将Step.2获得的沙漠藻细胞组合物培养液中的(Na⁺，K⁺,Mg²⁺)离子的终浓度为10^-4mM，得到促进沙漠藻细胞组合物生长的培养基；

Step.4接种：无菌条件下，将活化的沙漠藻细胞组合物接种至含有Step.3获得的促进沙漠藻细胞生长的培养基中，细胞初始浓度为10⁴～10⁵cells/mL；

Step.5培养：将接种后的沙漠藻细胞组合物置于光照架中培养，生长温度28～30℃，首先在蓝光条件下进行光照培养2天，蓝光光照强度为5000lux，然后再转接到红光条件下进行光照培养5天，红光光照强度为3000lux；光暗比18h:6h；

Step.6沙漠藻细胞组合物生长情况测定：每天从培养瓶中取少量培养液用血球计数板对沙漠藻细胞计数或用分光光度计测定培养液在540nm波长的光密度值，确定沙漠藻细胞的生长阶段，当沙漠藻细胞数量达到10⁸cells/mL或OD540稳定时即完成培养；

Step.7取50mL完成培养的沙漠藻细胞组合物培养液，用0.22um滤膜通过真空抽滤器收集细胞进行细胞干重测定；

Step.8收集沙漠藻细胞干重测定：将Step.6获得的收集有沙漠藻细胞的滤膜，置于105℃烘箱中烘干4h，干燥冷却后称量并计算，获得单位体积培养液中细胞干物质含量(mg/L)。