[发明专利]重组肠道病毒71型病毒样颗粒粒径检测方法及其在制备手足口病疫苗中的应用

说明书

本发明实施例公开了一种重组肠道病毒71型病毒样颗粒粒径检测方法及其在制备手足口病疫苗中的应用。所述方法包括以下步骤：在待检测的重组肠道病毒疫苗71型病毒样颗粒样品中，加入聚山梨酯80并混匀，至所述样品中聚山梨酯80的终浓度为50μg/mL‑400μg/mL；检测加入了所述聚山梨酯80的样品中所述病毒样颗粒的粒径。本发明可有效解决重组肠道病毒71型病毒样颗粒间聚集沉淀的问题，使重组肠道病毒71型病毒样颗粒在溶液中充分分散并能维持其稳定性，从而准确地测定该病毒样颗粒的粒径大小。

技术领域

本发明涉及重组肠道病毒71型疫苗制备技术，尤其涉及一种重组肠道病毒71型病毒样颗粒粒径检测方法及其在制备手足口病疫苗中的应用。

背景技术

手足口病可由多种病毒感染引起。其中，肠道病毒71型(Enterovirus 71，EV71)较其他病毒毒株更易导致出现重症甚至死亡病例。因此，重组肠道病毒71型病毒样颗粒疫苗的研发对于预防手足口病来说尤为重要。

重组的EV71病毒样颗粒是通过表达的蛋白间组装而成，其粒径大小反映了生理状态和生物学活性。在现有技术中，可以利用以动态光散射技术(DLS)为原理基础的纳米级粒度仪检测病毒疫苗产品、抗体或其他生物制品粒径。

然而，发明人在研究本发明的过程中发现，经纯化工艺得到用于配制疫苗的重组肠道病毒71型疫苗病毒样颗粒原液，在原溶液pH6.3-7.5的磷酸盐缓冲液体系中，重组EV71病毒样颗粒随着时间的变化而易于聚集沉淀为肉眼可见的大颗粒，干扰病毒样颗粒粒径的检测。且现有技术的纳米级粒度仪分析时无法区分聚集沉淀的大颗粒与在溶液体系中处于分散状态的病毒样颗粒，影响粒径检测的准确性，无法真实反映处于分散状态的病毒样颗粒粒径大小。

发明内容

本发明所解决的技术问题是，提供一种重组肠道病毒71型病毒样颗粒粒径检测方法，该方法可有效解决重组肠道病毒71型病毒样颗粒间聚集沉淀的问题，使重组肠道病毒71型病毒样颗粒在溶液中充分分散并能维持其稳定性，从而准确地测定该病毒样颗粒的粒径大小。

本发明进一步所解决的技术问题是，提供一种重组肠道病毒71型病毒样颗粒粒径检测方法在制备手足口病疫苗中的应用，该应用可有效解决重组肠道病毒71型病毒样颗粒间聚集沉淀的问题，使重组肠道病毒71型病毒样颗粒在溶液中充分分散并能维持其稳定性，从而准确地测定该病毒样颗粒的粒径大小。

为解决上述技术问题，本发明提供了以下技术方案：

一种重组肠道病毒71型病毒样颗粒粒径检测方法，包括以下步骤：

在待检测的重组肠道病毒疫苗71型病毒样颗粒样品中，加入聚山梨酯80并混匀，至所述样品中聚山梨酯80的终浓度为50μg/mL-1mg/mL；

检测加入了所述聚山梨酯80的样品中所述病毒样颗粒的粒径。

在一些可能的实施方式中，所述聚山梨酯80的终浓度为50μg/mL-400μg/mL。

在一些可能的实施方式中，所述聚山梨酯80的终浓度为100μg/mL-300μg/mL。

在一些可能的实施方式中，所述聚山梨酯80的终浓度为200μg/mL-400μg/mL。

在一些可能的实施方式中，所述聚山梨酯80的终浓度为100μg/mL-200μg/mL。

在一些可能的实施方式中，所述聚山梨酯80的终浓度为150μg/mL-200μg/mL。

在一些可能的实施方式中，所述聚山梨酯80的终浓度为50μg/mL-150μg/mL。

在一些可能的实施方式中，所述聚山梨酯80通过以下步骤加入：