[发明专利]脱敏治疗药物的活性检测方法

权利要求书

1.一种变应原蛋白活性检测方法，其特征在于，包含以下步骤：

步骤一、收集100份以上特异性IgE检测值为10～150Kua/L的血清进行合并，制备得到标准血清库，再测定标准血清库IgE值；

步骤二、包被：用包被液将变应原蛋白样品稀释后加入包被孔中孵育；

步骤三、封闭：洗涤包被孔，并加入封闭液孵育；

步骤四、样品稀释：待测变应原蛋白样品梯度稀释；

步骤五、混合孵育：将上述稀释的样品分别与血清混合孵育；

步骤六、加样孵育：孵育好的样品加入包被孔，继续孵育；

步骤七、二抗孵育：包被孔洗涤后加入二抗，孵育；

步骤八、显色读数；

步骤九、计算生物活性值：抑制率％＝(阳性值-样品值)/阳性值，以抑制率％作为横坐标，以Log₁₀稀释倍数为纵坐标，做二次曲线拟合；将50％抑制率代入曲线方程，计算出稀释倍数；生物学活性值(BU/ml)＝稀释倍数×100；比活(BU/mg)＝生物学活性值/蛋白浓度。

其中，阳性值：血清中总游离特异性IgE与包被蛋白结合时的检测值。样品值：血清中游离特异性IgE(总特异性IgE-被不同稀释倍数的样品结合掉的IgE含量)与包被蛋白结合的检测值；

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述包被步骤，尘螨变应原蛋白包被反应条件选择4℃孵育过夜；I型尘螨变应原蛋白包被缓冲液为碳酸缓冲液或磷酸缓冲液；II尘螨变应原蛋白包被缓冲液为磷酸缓冲液。

3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述样品稀释步骤，尘螨变应原蛋白样品稀释至20μg/mL后再进行梯度稀释。

4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述样品稀释步骤，I型尘螨变应原蛋白稀释后进行3倍梯度稀释；II型尘螨变应原蛋白稀释后进行6倍梯度稀释。

5.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述混合孵育步骤，I型尘螨变应原蛋白与11倍稀释度的血清混合孵育；II型尘螨变应原蛋白与5倍稀释度的血清混合孵育。

6.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述加样孵育步骤，蛋白与血清混合样品加入包被孔后孵育2小时。