[发明专利]一种新型唾液保存液及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种新型唾液保存液，包括如下组分：EDTA 1‑10mmol/L、Tris‑HCl 1‑50mmol/L、氯化钠10‑100mmol/L、山梨酸钠0.1‑3％(w/v)、双乙酸钠0.1‑3％(w/v)、proclin300 0.01‑0.1％(v/v)、TWEEN20 0.1‑1％(v/v)、NP40 0.1‑1％(w/v)、SDS 0.1‑2％(w/v)；本发明的唾液保存液保存唾液样本，可以有效抑制核酸酶的活性，防止微生物的污染、保证DNA的片段完整性和纯度，同时简化预处理步骤，且适用于无离心机和低温环境下使用能够保证样本在各地之间的运输的稳定性，适用于分子流行病学大规模人群调查研究。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种新型唾液保存液的组合物及其制备和生产使用方法，适用于唾液收集后的运输和储存，后续仅用于体外检测。

背景技术

随着社会的进步，核酸DNA在基因检测、疾病检测与治疗、法医鉴定等领域运用越来越广泛。通常人类遗传基因分析的样本DNA，来源是血液、组织、体液。用于PCR扩增及检测的核酸DNA普遍来自血液样本。血样的采集需要依靠专业技能才能完成并且对人体造成一定的创伤。血样保存时间过长等因素造成血凝块，也会造成提取不便，无创、简便、快速的检查诊断方法受到研究人员的普遍关注。

与血液样本相比，唾液采集安全方便，无创伤，无血源性疾病传播的危险，患者无痛苦于接受，因而能最大限度地扩大基因研究的取样范围，特别适合分子流行病学大规模人群调查。

由于唾液中微生物种类多以及脂质、多糖、黏蛋白等杂质的存在，随着样本保存时间的增加，通常会生长大量的微生物造成人类遗传基因的占比减少以及降解。另一方面，不适当的保存液会造成DNA的降解及下游检测抑制。

通常市面上的唾液保存液需要离心收集唾液细胞再加裂解液裂解细胞，需要借助于离心机且预处理繁琐。本发明中的唾液保存液预先喷涂于采集管底部并烘干，收集到的唾液样本在运输途中裂解，简化预处理步骤，且适用于无离心机和低温环境下，能够保证样本在各地之间的运输的稳定性。

发明内容

本发明利用唾液保存液保存唾液样本，在运输过程中裂解细胞，抑制微生物的污染，保护基因组DNA的完整性。

本发明采用以下技术方案：EDTA 1-10mmol/L、Tris-HCl 1-50mmol/L、氯化钠 10-100mmol/L、山梨酸钠0.1-3％(w/v)、双乙酸钠0.1-3％(w/v)、proclin 300 0.01-0.1％(v/v)、 TWEEN 20 0.1-1％(v/v)、NP40 0.1-1％(w/v)、SDS 0.1-2％(w/v)，体系pH范围在7-8之间。

上述唾液保存制备方法，具体包括以下步骤：

(1)取上述所述配比的原料；

(2)将步骤(1)中称取的EDTA、Tris-HCl、SDS分别配制成溶液后保存；其中pH为6-8.5 的Tris-HCl缓冲液。

(3)根据预配制的唾液保存用的总体积，结合体系中各组分的含量要求，选用相应体积的 EDTA溶液、PH为6-8.5的Tris-HCl缓冲液、SDS的储存水溶液，加入相应量的山梨酸钠、双乙酸钠、氯化钠、TWEEN 20、NP40、proclin300，补加无菌水至预配制的唾液保存总体积，采用微孔滤膜过滤的方式进行除菌，得到所述唾液保存液,保存液的保存温度为15-25℃。

按上述方案，步骤(3)中的体系pH值在需要时可通过加入HCl或者NaOH调节PH至范围在7-8之间，其中HCl或者NaOH的加入量很少，对体系中各组分浓度的影响可忽略不计。

上述唾液保存生产使用方法，具体包括以下步骤：