[发明专利]一种CYP2C19基因多态性检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种CYP2C19基因多态性检测试剂盒及其应用，该试剂盒包括用于检测CYP2C19*2(G681A)的正反向引物、野生型检测探针和突变型检测探针，用于检测CYP2C19*3(G636A)的正反向引物、野生型检测探针和突变型检测探针，以及两个位点共用的野生型淬灭探针和突变型淬灭探针，且野生型检测探针和突变型检测探针分别标记不同的荧光基团。本发明利用锁核酸技术提高了探针结合的特异性，结合多重荧光PCR技术检测CYP2C19基因多态性，操作方便快捷，检测结果易于判读，特异性强，准确度和灵敏度高，为氯吡格雷临床用药提供有效依据。

技术领域

本发明涉及基因检测领域，尤其涉及一种CYP2C19基因多态性检测试剂盒及其应用。

背景技术

氯吡格雷，药品名称波立维，是一种由二磷酸腺苷受体介导的血小板聚集抑制剂，可用于防治心肌梗死、缺血性脑血栓、闭塞性脉管炎、动脉粥样硬化及血栓栓塞引起的并发症，在经皮冠状动脉介入治疗术后的应用中，可显著的降低支架血栓的发生率，目前己做为皮冠状动脉介入治疗术后标准抗血小板治疗的重要药物之一。但是，使用氯吡格雷进行长期治疗的患者有时会再次地发生急性冠脉综合征，严重的甚至危机生命。经大量研究证明这是由于氯吡格雷介导的血小板聚集抑制率存在个体差异所导致的。因此，近年来，对氯吡格雷反应存在个体差异的研究受到越来越多的关注。

氯吡格雷作为前药本身并没有抗凝作用，经过细胞色素P450(Cytochrome P450，CYP)代谢后转化成为活性代谢物，才能产生血小板抑制效应。氯吡格雷在体内的作用过程中，主要经CYP2C19代谢，受CYP2C19基因多态性影响较大。根据CYP2C19代谢S-美芬妥英或其他探针药物的能力，由遗传决定的CYP2C19底物的代谢多态性在人群中有两种表型，称为强代谢型和弱代谢型，相应的个体则分为强代谢者(extensive-metabolisers，EMs)和弱代谢者(poor-metaboisers，PMs)，相对与基因型分析结果，PMs有三种基因型(CYP2C19*2/*2，CYP2C19*2/*3或CYP2C19*3/*3)，EMs有两种基因型为纯合子(CYP2C19*1/*1)和杂合子(CYP2C19*1/*2，CYP2C19*1/*3)。中国人群中14％为CYP2C19慢代谢型，常规剂量的氯吡格雷在慢代谢型患者中产生的活性代谢物减少，抑制血小板聚集作用下降，形成血栓风险增加。2010年美国食品药品监督管理局修改的氯吡格雷说明书中黑框警告：明确建议医生对将要服用氯吡格雷的患者进行CYP2C19基因分型检测，针对患者基因型实施个性化用药。因此，CYP2C19基因多态性检测对于氯吡格雷临床用药有着重要意义。

目前，针对CYP2C19基因多态性检测的方法有多种，主要包括DNA直接测序法、高分辨率溶解曲线法和液相芯片法。DNA直接测序法虽然是最常规的检测方法且是金标准，但步骤繁琐，耗时长。高分辨率溶解曲线法对仪器的需求较高，绝大部分的实时荧光定量PCR仪无法适用。液相芯片法操作过程复杂，且容易污染，假阳性率高。

发明内容

有鉴于此，本发明提出了一种操作方便快速、特异性好、灵敏度高的CYP2C19基因多态性检测试剂盒及其应用。

本发明的技术方案是这样实现的：

第一方面，本发明提供了一种用于检测CYP2C19基因多态性的引物探针组合物，用于检测第681位点和第636位点基因多态性，包括以下引物及探针：

用于检测CYP2C19*2(G681A)的引物探针：

正向引物1：5’-AAATTTCCCCATCAAGATAT-3’(SEQ ID NO.1)

反向引物1：5’-TACGCAAGCAGTCACATAAC-3’(SEQ ID NO.2)

野生型检测探针1：5’-ATGACGTGATCTTGATACTATCATTGATTATTTCCCGG-3’(SEQ IDNO.3)