[发明专利]适合大规模临床级病毒载体制备的培养基及其应用有效
申请号: | 201911398385.0 | 申请日: | 2019-12-30 |
公开(公告)号: | CN113122501B | 公开(公告)日: | 2023-06-16 |
发明(设计)人: | 张巍;唐文凤;郑姣 | 申请(专利权)人: | 重庆精准生物技术有限公司 |
主分类号: | C12N5/10 | 分类号: | C12N5/10;C12N7/00;C12N15/867 |
代理公司: | 北京元本知识产权代理事务所(普通合伙) 11308 | 代理人: | 黎昌莉 |
地址: | 400000 重*** | 国省代码: | 重庆;50 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 适合 大规模 临床 病毒 载体 制备 培养基 及其 应用 | ||
本发明属于生物病毒领域,具体涉及VaccineXpress培养基培养用于慢病毒制备的培养方法,该方法是先将包含目的基因的慢病毒载体在含FBS的培养基中培养,然后再在VaccineXpress培养基中培养。该方法能有效降低BSA残留,可用于临床级别的慢病毒制备,可以显著提升慢病毒滴度,适合大规模临床级慢病毒生产,而且更换至无血清培养基无需对工作细胞进行无血清驯化,简单方便,耗时短。
技术领域
本发明属于生物病毒领域,具体涉及一种含谷氨酰胺的VaccineXpress培养基培养包含目的基因的慢病毒载体的方法。
背景技术
目前临床上的基因治疗载体以病毒性载体为主,主要的病毒载体包含腺病毒、溶瘤病毒和逆转录病毒。其中逆转录病毒载体,常用的包括γ逆转录病毒和慢病毒载体,被用于将基因稳定导入哺乳动物细胞的临床研究已有近30年。逆转录病毒可以有效的整合入靶细胞基因组并稳定持久地表达所带的外源基因。
慢病毒载体属于逆转录病毒的一种,相比于其他逆转录病毒,慢病毒载体具有更广的宿主范围,能够有效感染非周期性和有丝分裂后的细胞。而且慢病毒载体是以人类免疫缺陷I型病毒(HIV)为基础改造的基因治疗载体,来自HIV-1的慢病毒载体,由于可以承载较大的外源目的基因片段,能够感染非分裂期细胞,在体内能够稳定整合,并且较少发生基因沉默现象。且对于一些较难感染的细胞,如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等,使用慢病毒载体,能大大提高目的基因的转导效率,增加目的基因整合到宿主细胞基因组的几率,从而能够比较方便快捷地实现目的基因长期、稳定表达。慢病毒载体以及免疫反应小,安全性较好等优点,在临床研究中得到广泛应用,尤其是第3代自身缺陷型慢病毒载体,具有极高的生物安全性。
随着研究从基础向临床阶段的发展,对慢病毒的需求量也大大增加,常规的慢病毒生产方法已难以满足,迫切需要能够大规模生产高质量的满足临床需求的慢病毒制备方案。常规的慢病毒制备法需使用含FBS的DMEM培养基培养,在质粒转染前及转染后各进行一次换液,因为使用含FBS的培养基,导致所产的慢病毒料液中含有大量的BSA残留,而临床级的慢病毒,对BSA的残留有明确的限制,而慢病毒纯化对BSA的去除能力有限,往往造成慢病毒纯化后BSA残留依然较高,不能满足临床需求;另一方面,虽然目前市场上有一些无血清培养基,但是没有专门针对慢病毒制备的培养基,且这些无血清培养基用于慢病毒制备大多效果不佳,因此急需一款可用于慢病毒制备的培养基及其培养方案。
发明内容
有鉴于此,本发明目的之一在于两种培养基组合,该组合在慢病毒载体包装和慢病毒制备中,可以起到协同作用。
为实现上述目的,本发明的技术方案为:
适合大规模临床级病毒载体制备的培养基组合,所述培养基包括常规培养基和VaccineXpress培养基。
进一步,所述培养基中的所述常规培养基为含FBS的DMEM培养基,FBS的含量为本领域技术人员常规用量,如含5%或10%的FBS的DMEM培养基。
进一步,所述培养基组合中,所述VaccineXpress培养基中添加有谷氨酰胺,谷氨酰胺的添加量为本领域技术人员常规用量,如含有1%的谷氨酰胺。
作为优选,所述的培养基组合中,所述VaccineXpress培养基为独立包装。
慢病毒载体是指以人类免疫缺陷病毒-1来源的病毒载体,包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息,是慢病毒载体系统的主要组成部分。携带有目的基因(功能基因)的慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下,经过病毒包装成有感染力的病毒颗粒,通过感染细胞或活体组织,实现目的基因在细胞或组织中表达。在整个过程中,本发明采用了两种培养基联合运用:VaccineXprees培养基能够用于慢病毒的制备,并且使用该培养基可以显著提高慢病毒的感染能力,远高于其他类别的无血清培养基和常规的5%FBS的DMEM培养基。因此VaccineXprees培养基用于慢病毒的制备能够生产比传统生产方案更高的病毒产量。
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